摘要：树突细胞是目前已知功能最强的抗原呈递细胞，以DC介导的特异性抗肿瘤免疫治疗主要依赖于细胞毒性T淋巴细胞介导的细胞免疫，现己运用于I、II期临床试验。对某些实体瘤(如恶性黑色素瘤、前列腺癌和肾癌)的治疗已取得满意疗效，但对抗原性较弱的结肠癌、肝癌等实体瘤则疗效欠佳。
树突细胞是目前已知功能最强的抗原呈递细胞，以DC介导的特异性抗肿瘤免疫治疗主要依赖于细胞毒性T淋巴细胞介导的细胞免疫，现己运用于I、II期临床试验。对某些实体瘤(如恶性黑色素瘤、前列腺癌和肾癌)的治疗已取得满意疗效，但对抗原性较弱的结肠癌、肝癌等实体瘤则疗效欠佳。究其原因主要是这些肿瘤抗原性弱，且肿瘤患者体内DC存在呈递功能缺陷。利用肿瘤细胞。mRNA转染DC是一种装载肿瘤抗原的有效方法，可以避免结肠癌等抗原性弱的缺陷。
一、材料与方法
动物与细胞株Balb/c小鼠，雄性，6-8周龄，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司：293细胞购自上海细胞生物研究所；小鼠结肠癌细胞CT-26株为南京军区南京总医院肿瘤内科实验室常规传代。
月泉病毒非增殖型重组腺病毒Ad-mIL-12和Ad-Lac-Z为上海医元生物基因科技公司惠赠。
小鼠骨髓DC培养在无菌条件下取小鼠股骨，冲洗出骨髓细胞，Tris-NH4Cl溶解去除红细胞，磷酸盐缓冲液洗2次后，加入含10%新生牛血清的RPMI1640培养液，调节细胞密度为lx106/ml，再加入miGM-CSF10ng/ml，rmlL-43ng/ml，置培养瓶培养。之后每隔3d，吸弃培养液及悬浮细胞，重新加入新鲜培养液及:mCM-CSF10n留ml，mill-43ng/ml，体外培养第9d，吸取培养上清及悬浮细胞，调整细胞密度后以6x106/孔加入6孔板，各孔补加新鲜培养液3nil及rmCM-CSF10n扩nil，rmIL-43n扩nil，培养过夜，轻轻吹吸后吸取全部培养液及悬浮细胞，即获得DC。
体外培养获得DC小鼠骨髓细胞体外加入rmGM-CSF10n岁rnl，rrn1L-43n酬ml培养3-5d后，出现大量贴壁的增殖性细胞集落，上清中有死亡的T，B细胞、红细胞、粒细胞，换液后被去除，培养9d后，大量增殖的细胞开始散落在培养上清中，重新贴壁培养过夜后，DC悬浮在上清中。1只小鼠骨髓经体外培养9d可以获得大量(2x107以上)DC，FAGS鉴定DC特异性标记CD11c细胞&90%，表明培养获得的DC具有极高的纯度。
IL-12又称自然杀伤细胞刺激因子或细胞毒淋巴细胞成熟因子，其具有多种免疫调节功能，能显著增强自然杀伤细胞及CTL细胞毒作用；促进T细胞、NK的增殖：诱导Th1淋巴细胞增殖、分化；抑制肿瘤血管生成和抑制肿瘤的生长和转移；刺激T细胞及活化的NK产生多种细胞因子，如干扰素等，这些细胞因子又能以一种正反馈旁分泌的方式活化DC，上调其CD80，CD86等多种共刺激因子的表达，从而增强DC呈递抗原、活化T淋巴细胞产生抗原特异性免疫应答的能力。
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罕见难治的重度气管软化病治疗获突破
日 14:09:48
　来源：新华网
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中国人民解放军总医院第二附属医院（原解放军309医院）全景图。图为从百望山顶俯视医院营区。&
&&&&新华网消息：解放军总医院第二附属医院有关专家采取气管支架介入手术的方法，在治疗罕见难治疾病“复发性多发性软骨炎导致的重度气管软化病”上取得了明显效果。
解放军总医院第二附属医院放射科主任敖国昆介绍说，由于这类手术在患者“憋一口气”的时间里完成，因此被业内形象地称为“一口气”手术。
患者亲手缝鞋垫答谢专家
&&&近日，解放军总医院第二附属医院政治部收到宁夏吴忠寄来的包裹，打开一看，竟然是十几双手工绣制的精美鞋垫和一封信。
信上说，“我妈妈2003年初患病，咳嗽、气喘、憋气，不能躺下，生活痛苦，四处求医诊治效果不佳，最后贵院确诊为复发性多发性软骨炎所致的气管软化，放射科敖国昆主任和呼吸科赵卫国主任联手为老人家手术、治疗，她的病情明显好转，生活质量大幅提高。五年来，两位主任一直用电话、短信等方式关心我妈妈的病情，全家人感激不尽，元旦临近，老人家亲手绣制了几双鞋垫送给亲人解放军，以表达感激之情。”
&&& 呼吸科主任赵卫国说，高某是我部首例复发性多发性软骨炎所致的重度气管软化病
患者。“她来院就诊时，咳嗽、气喘，鼻梁塌陷，形状像马鞍一样，排除单纯呼吸系统疾病，多科会诊确诊为复发性多发性软骨炎所致的重度气管软化病。”
赵国卫说，“实施气管支架介入治疗后，又让她坚持服用药物治疗5年，现在她生活能自理，情况较平稳，是我国存活时间最长的患者之一。”
&&& 什么是复发性多发性软骨炎？
复发性多发性软骨炎所致的重度气管软化病是一种罕见难治病，我国有资料记载的仅十余例，解放军总医院第二附属医院就收治有6例。
这种病虽然是良性病，但病人喘得厉害，步行困难，而且一躺下也喘不上来气，因此只能端坐，就连睡觉也得坐着，极大地影响患者的生活质量。
放射科主任敖国昆介绍说，国外曾采用气管插管、气管移植等方法治疗复发性多发性软骨炎所致的气管软化，但效果并不明显。“当时我们多方查阅文献资料，请教导师、同行，多科协作，反复研究，最终决定为患者进行气管支架介入手术治疗。”
&&& “手术只需几秒钟
第二天就能下地走路”
敖国昆说，“经过一番精心的准备，2003年9月，在血管造影机下，我将一枚Y型支架在患者憋一口气的时间里精准地放在患者气管分支处，将气管隆突软骨撑起，使患者呼吸畅通，咳嗽、哮喘症状立即改善，第二天就能下地走路了。当时，用短短几秒钟时间完成Y型气管支架介入手术在全国是首例，被业内称为‘一口气手术’推广应用。”
据敖国昆介绍，解放军总医院第二附属医院近年来又对气管支架进行了研究改进，配合药物治疗，使患者术后效果进一步改善。（李杰）
&&& &咨询电话：010-
&&&&专家出诊时间：周一上午、周三全天
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