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【求助】细胞计数我就是弄不明白，急死我了
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话说细胞计数的原理和使用计数板我倒是明白，可是怎么就计不出自己想要的细胞浓度呢，很是着急，我养的是SGC7901，用的是25ml培养瓶，请教大家，我收集几瓶生长到80%的细胞加入几毫升培养基制备悬液才能达到我想要的细胞浓度1*10~7呢？教教我吧！查看完整版本请点击这里：
wmp1234 ( 13:28:22)
QUOTE:原帖由 qqq111 于
13:27 发表
你先将培养基里的细胞吹稀混匀，然后计个数。再根据你计数的结果吸出一定数量的细胞，再补足剩余的培养基就可以了。 首先谢谢你给我回复，可是你说的太含糊了，我还是不会，请细化指教
ROSE李 ( 13:28:45)
/bbs/topic/5257898?keywords=如何调整细胞浓
如何调整细胞浓度
楼主看看 如果还是不明白再探讨
wmp1234 ( 13:29:08)
谢谢分享，其实我是想制备10~7细胞接种到裸鼠皮下，收集这些细胞25ml的培养瓶大概需要多少瓶啊
zzzz ( 13:29:28)
10瓶吧，你这样，先全部收集好。然后计数，然后计数得到的浓度乘以计数时的体积，得到总的细胞数。离心去上清（小鼠实验药用PBS重悬细胞），然后用细胞总数除以你要的浓度，得到你应该加的PBS的量。
wmp1234 ( 13:29:53)
感谢楼上的建议，对我很有帮助,问一下，要是10瓶的量可以达到10^7数量级，我往每只裸鼠皮下注射5*10^6/0.2ml，共20只裸鼠，是不是大概得需要30到40瓶25ml的细胞加上4mlPBS重悬啊，那么多瓶咋能一下全消化下来呀？有没有什么好的方法？另外问一下用无血清培养基重悬细胞可吗？
vivian4123 ( 13:30:16)
楼主你好~以本人经验来看，1*10^7数量级细胞大约10个10cm dish绰绰有余了，为什么你需要那么大的量呢？你这种实验情况我也遇到过，首先你所使用的培养瓶在细胞长满约80%满的时候，进行计数，具体方法我就不细说了，按照公式得出多少个细胞/mL，再根据你培养瓶里面悬浮液总体积，可粗略估计一个培养瓶（80%满）可获得多少细胞量。
在你进行后续实验工作时候，可将所有的方瓶细胞分别进行消化，取少许稀释下，分别进行计数，得出每瓶细胞总数，一般不会相差很多，最后将所有方瓶的细胞悬液集中到一起，离心，弃培养基，按照细胞总量（所有方瓶）=1*10^7个/mL*?mL PBS进行重悬即可
abc816 ( 13:30:37)
你可以用T75的瓶子（补充一下，你用的是底面积25cm2的瓶子吧，25ml是啥情况），T75的瓶子底面积是T25的3倍，长出的细胞量也差不多是3倍。或者更大的T175的瓶子，1个顶7个。反正你要的细胞总量是1*10的7次方，最后离心加4ml生理盐水或者PBS，（没用培养基注射过裸鼠，建议最好不要用培养基，我们注射前用PBS或盐水洗两遍就是为了把培养基洗掉）。你现在还是先计数算一下一瓶能长多少，然后用1*10的7次方除以1瓶的细胞数，就得到你要养的瓶数。然后就是T75一个顶3，T175一个顶7个小瓶。
wmp1234 ( 13:31:04)
另外再向大家讨教个问题，由于我做细胞实验的地和动物实验室距离比较远，大概1个小时的车程，那么我制备完的细胞悬液如何暂时保存并毫发无损的运到目的地呢？
abc816 ( 13:31:23)
我们实验的protocal是半小时内要注射完，不然可能影响成瘤率。你这路程也忒远了吧
wmp1234 ( 13:31:51)
没有办法啊，我想将细胞消化下来，用培养基重悬放在15ml离心管里，再放入冰盒里拿过去，不知道可行不？
ynjk110 ( 15:39:39)
这些问题都好高深啊
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我不知道怀孕的情况下喝了两杯红酒，有事吗，请有经验的姐妹帮帮忙，急&&&&&&
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小学一年级
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我不知道怀孕的情况下喝了两杯红酒，有事吗，请有经验的姐妹帮帮忙，急
我上次例假10月15日，到11月15日我用试纸测一条线，11月17日单位的聚餐喝了两杯多一点红酒，11月18日下午测出两条线，有一条很浅，我现在44天了但老是担心有什么影响。请姐妹们帮帮忙
小学一年级
有姐妹知道吗，我担心的吃不下饭了
大学一年级
不用太担心，喝一次是没关系的，以后就不要喝了，另外要保持轻松愉快心情，情绪是会影响到宝宝的
刘小兔，你要让我省心呀
研究生三年级
没事，宝宝都很坚强的，放心吧
小学一年级
谢谢亲 ，我一直保持一滴不沾的，半年就这一次喝了，居然就有了
小学一年级
谢谢亲们，问了医生都不明确说什么
大学四年级
不用太担心，一两次的没关系的，医生都怕担责任，千万别吃药就行了
【转】童泰六合一宝宝背带，抱抱熊学步带
/thread--1.html
小学一年级
好的，我知道了，我老公一直倒是戒酒了，我却喝了酒，很自责
小学一年级
去医院，医生先是跟我说，有人吃了避孕药但是怀孕了，还生下一个健康的儿子呢，后来又说没有医学证明酒精对胎儿的影响
高中三年级
我不知道怀孕的时候也喝过一次红酒，没事的，lz放心吧
小学一年级
谢谢亲，姐妹们说了我放心多了，中午宽心的睡了一觉
因为担心前几天还做噩梦
大爱！大爱！求亲给链接！感激！
快速求链：
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你有慧眼！跪求宝贝出处，不胜感激
好喜欢你的宝贝！方便告知购买地址吗？谢谢啦！
偶像！能给我这个宝贝的链接吗？太喜欢了！感激涕零！
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因包含敏感字符被屏蔽
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UID7455277帖子威望-5 多玩草129 草
蓝宝石 HD5750 黄金版
最近在玩测试服&&出现过2次小块的花屏&&就一会儿& && &别的都没什么问题& &人多的地方也不卡
然后我就验证了下 那个防伪标志
打那个电话 感觉好假 里面&&第一次查询 我输入20位号码&&里面也不说是不是真版的&&就挂了&&然后接着再打电话&&说无法重复查询
电话是800 830 3155& & 可是我刚才在网上查询了下&&别人说是800-830-3315& &&&然后我打800-830-3315& & 这个输入了20位号码 对方说 此号码没有登记过
然后发短信查询更离谱&&发送20位号码到这个 & &然后马上就给我短信了 确认号码就回复18 我就回复了 然后马上就收到消息&&说什么感谢使用查询业务& &服务代码
信息费0.3元&&有移动代收&&客服电话010-- & &我就打了过去 对方说是中国十字会会 彩票什么的 我晕哦& && && & 过了会我再次发送 显卡上20位号码到&&就没反应了
我买了个盗版显卡吗？
有谁遇到过&&知道的？
[ 本帖最后由 越长大..越孤单 于
19:55 编辑 ]
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好好的活着 因为 我们会死很久! ...
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盗版？山寨的吧
好好的活着 因为 我们会死很久!
暧昧Oo让人委屈
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看你是用多大的显示器玩。
BIT。。。如果用22寸以上的显示器玩花屏很正常了
暧昧Oo让人委屈
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很像被骗了
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SAW门徒不是好惹滴
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买到假货那确实是太可怕了
lonely愛?血之羽
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that's not a God
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我的也是5750，不花屏
估计是接触不好
& && && && && && && && && && && && && &已
& && && && && && && && && && && && && &不
& && && && && && && && && && && && && &在
& && && && && && && && && && && && && &三
& && && && && && && && && && && && && &神
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驱动没装好吧，刚买的吗，配置有点过时
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LZ，你把GPU-Z的显卡信息发出来看看
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UID帖子威望0 多玩草40 草
把黑显卡照几个相上来看看，，看看是不是真的, 蓝宝石的卡好象假的不多
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UID7455277帖子威望-5 多玩草129 草
我查询了 800-830-3315 这个查防伪的& & 说此号码没有登记过& &
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UID5560031帖子威望-1 多玩草422 草
LS说的都不靠谱。。。
我来告诉LZ吧。。
5750这个显卡当初是有问题的。就是花屏
原因出在ATI的显示芯片上。。。5750当初这是返过工的。。。。
哎。。我本来也想买5750的。。听了业内的人……就没敢买。。
没想到遇到LZ这一白鼠
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UID7455277帖子威望-5 多玩草129 草
来帮忙看看&&
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UID8054510帖子威望10 多玩草282 草
少一些争吵,多一些宽容... ...
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UID2504811帖子威望16 多玩草1641 草
据我所知5750问题是不少
至于LZ遇到的是不是山寨的不好说 但是正规显卡不可能说防伪电话里面做的这么山寨的
如果个人欧比斯点数是我的底薪，奖励欧比斯点数是我的奖金，该有多好~
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我的小公博美.到处乱拉小便,大便还好它会叫,这可怎么教呀,我都急死了,大家帮帮忙,我没有经验.非常感谢!
可是它还是乱拉它才两个多月,拉的我床上都是了,我又小忍心打它,轻轻拍拍它头,让它知道到处乱拉是错的,天天换床单,急呀
提问者采纳
如果它已经大小便了，正确的诱导它小狗狗膀胱肌还没发育完全。学会定点便便之后。对小狗狗要耐心，不要对它太强求了啦。多试几次小狗狗就会知道那才是它的厕所，放在你指定的地点。另外可以买警犬训练中心生产的诱便液！等他大一点，那是因为它喜欢在自己曾经便便的地方再次便便，为它准备一个狗厕所或者报纸，它可能还是会在其他地方便便，每次他要大小便的时候带它去。所以要买除臭剂来清除那些味道，只要除掉以前的味道，人闻不到但它还可以闻到，博美很聪明的，那个味道很难完全洗掉，可以帮助它学会定点大小便，然后把它抱过去让他闻，把它的便便沾一点在报纸或者尿垫，它会很快学会
提问者评价
谢谢你,我试着用的方法去做,小便会拉报纸上,但便便还不是一定都拉报纸上面,慢慢教吧`!
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其他2条回答
小狗在年幼时期，大小便都不规律，训练起来有一定难度，作为主人的您一定要有耐心。您在训练它在指定地点大小便之前，一定要确保它已经听懂自己的名字，还要听懂您对它的赞扬和批评的语气。您在小狗每天早晨起床和每次饲喂之后，带它到您想让它大小便的地方去，等候它方便，如果做对了要及时表扬它。如它没有在您指定的地点方便，被您发现要用严厉的语气告诉它这是错的（可以用报纸卷拍打地面以示警告），然后将地面彻底清洗，喷上除臭剂。反复多次，小狗就能记住什么地方可以方便、什么地方不可以了。
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