as you sow so seap是什么意思?在泰国看见的,挂在一棵树上,大概是一句鼓励的话吧,有谁知道?
孤单独行O頳
种瓜得瓜是这个As a man sows ,so he shall reap可能这句话大概也是这个意思吧,希望能对你有一点帮助
为您推荐：
其他类似问题
你播种等SEAP型
扫描下载二维码月度关注热点
[求助]有谁知道AS-PCR吗？
查看完整版本请点击这里：
[求助]有谁知道AS-PCR吗？
我查到一些资料，其中国外的使用AS-PCR后都用DNA测序，我还没有这个条件，如果不进行测序行吗？ 查看完整版本请点击这里：
冰儿0109 ( 13:34:53)
你只要将几个样品送到别处测序，以证明扩增产物就行了，我有一个师兄做过。
+田田+ ( 13:35:18)
正好借东风问两个问题：
1. 内引物一般有2条，可以2条都是正向的，仅有最后一个碱基不同；也可以一条正向，一条反向的。你们觉得哪种比较好？
2. 内引物的参数多半由源序列决定，请问您如何处理好TM值，GC含量等问题；和外引物的TM值，GC含量有什么关系要注意吗？
3. 仅仅靠引物最后一个碱基的不同来判断扩增结果，如何区别假阴性与假阳性？换句话说，这样的把握有多大？
森林木 ( 13:36:21)
AS-PCR 的关键是引物的特异性！
同时为了确保扩增的特异性，即实验的可信度（排除假阴性和假阳性），必须要有标准品。
==============================================================================
我查到一些资料，其中国外的使用AS-PCR后都用DNA测序，我还没有这个条件，如果不进行测序行吗？
==============================================================================
我想老外也不是每个标本都拿去测序，如果是那样的话，直接测序不就得了，还要费两回事干啥？我想正如楼上一位战友讲的那样，随机挑选几个（也可以多些）送去测序，确定好阴性对照和阳性对照，就可以放手做了！
PS:我也正在做这方面的实验，有问题大家共同交流！
====================================================================================
3. 仅仅靠引物最后一个碱基的不同来判断扩增结果，如何区别假阴性与假阳性？换句话说，这样的把握有多大？
====================================================================================
这个问题还是别沉下去！
我设计的引物也是只有最后一个碱基不同，而且文献上的引物序列有很多也是这样的，3‘末端只错配一个碱基能屏蔽掉非特异扩增？
希望群中有关高手讲讲引物设计的另类技巧（PS:不要总是讲大家都知道的原则性问题噢，比如：引物一般有.......等等。 ）
蝴蝶结子 ( 13:36:42)
正好借东风问两个问题：
1. 内引物一般有2条，可以2条都是正向的，仅有最后一个碱基不同；也可以一条正向，一条反向的。你们觉得哪种比较好？
2. 内引物的参数多半由源序列决定，请问您如何处理好TM值，GC含量等问题；和外引物的TM值，GC含量有什么关系要注意吗？
3. 仅仅靠引物最后一个碱基的不同来判断扩增结果，如何区别假阴性与假阳性？换句话说，这样的把握有多大？
3.以我看到过的文献和我作过的实验,认为,仅仅靠引物最后一个碱基的不同来判断扩增结果并不很准确,可以通过将倒数第二个碱基故意设置成错配来增加最后一个碱基的识别准确度.
此外,我的另一点感受是内对照引物的Tm值与特异引物的Tm值比高一点为好,这样在编制PCR程序时就可以分阶段扩增,而特异引物的Tm值则越接近越好.
店小二 ( 13:37:04)
各位高手：用那么复杂的设计引物吗？实质上我觉得AS-PCR既然利用其等位特性，用来检测异质性更好一些，而且也可以对其中一种变异体进行相对定量。当然也可以用来检测SNP，但是用于此我个人认为只是在该位点缺少相应的内切酶时才凸现出并利用AS-PCR的方法来检测，当然也可以检测各种其他变异，包括突变。
请问我说的对吗？请指正！
我佛慈悲 ( 13:37:29)
回答得好，DXY关于AS-PCR的帖子好像不多，不如就让这个帖子成为集中讨论的AS-PCR专贴。供大家交流心得如何？&&
阿拉蕾 ( 13:37:51)
1. 内引物一般有2条，可以2条都是正向的，仅有最后一个碱基不同；也可以一条正向，一条反向的。你们觉得哪种比较好？
2. 内引物的参数多半由源序列决定，请问您如何处理好TM值，GC含量等问题；和外引物的TM值，GC含量有什么关系要注意吗？
3. 仅仅靠引物最后一个碱基的不同来判断扩增结果，如何区别假阴性与假阳性？换句话说，这样的把握有多大？
ASPCR的理论基础应是:引物3'末端的末位碱基在很大程度上影响着TaqDNA聚合酶的延伸效率。国外资料表明，引物3'末端碱基在错误配对时不同碱基的引发效率存在很大差异。当末位碱基为A时，即使在错配的情况下，也能引发链的合成，而末位碱基为T时，错配时引发效率大大降低，G、C居于中间。
因此内引物的正反向主要由3'末端的末位碱基决定。
由于内引物的位置由源序列决定，其TM值和GC含量只能通过引物长度的变化来调节，在考虑正反向时也可将TM值和GC含量考虑进去。外引物的TM值和GC含量应尽可能与内引物一致。
外引物可作内对照来区别假阴性。&&
阿拉蕾 ( 13:38:12)
很高兴有站友讨论这个问题，我以前在版面里提到过，但没有详细讲，我在这里给大家介绍一下基本概念。 欢迎大家一起讨论。
Allele-specifice PCR一般用3’mismatch PCR，需要设计两个Allele-specific primer和一个common primer。我不知道上面站友指的内引物是不是指Allele-specific primer。一般AS-PCR需要在real-time PCR 仪器上做。以下是一个简单的示意图，两个Allele-specific primer的序列基本上是一样，只有3’不同，各自和SNP中的一个Allele一样。一般这两个Allele-specific primer的Tm设计成一样，所以有时其中一个primer会比另一个多一两个碱基，如果3’一个是A/T对G/C SNP，A/T的primer就可能要在5’多加一个碱基。Common primer的Tm一般设计稍微高一点。
2 allele-specific primers
————————A
————————B
————————A———————————————
————————B———————————————
............................................. ——————— one common primer 3'
用3’mismatch PCR，一个样品分别做两个反应
反应 1： A primer+common primer
反应 2：B primer+common primer ，
AS-PCR可以用普通的SYBR green I 来检测产物，在任何real-time PCR仪器上都可以做，对于每个样品，如果是AA homozygous，就只有反应1有扩增曲线。如果是BB homozygous，就只有反应2有扩增曲线，如果是AB heterozygous，反应1，2都应该有扩增曲线。
AS-PCR对于Polymerase的要求比较高，一般的Taq是不行的，最好用Taq Gold （hot start enzyme)，当然还有其他更特异的酶。
测序只是为了检测所设计的引物和反应是否准确和特异，不需要对所有样品都做。做几个就行了。
因为一个样品要两个反应，所以有可能遇到假阴性，特别是杂合子，如果一个反应中漏加了样品，杂合子的结果就和纯合子一样了。这个比较难控制，需要很仔细的操作或者用robot做。
有时AS-PCR会遇到引物二聚体造成假阳性，这个可以用空白对照来检测。
AS-PCR是很好而且比较便宜的方法来做SNP genotyping。方法已经很成熟。
我佛慈悲 ( 13:38:38)
ttggaagccttactctaatattttggccttgggtctacatttctcagttctgcacagtcattcttcccctctacactactctttagtttgtctcatgattccaatactctcaataattaaccaagaatagaactaatcaatcagataactgtggcacagacatcaaatacattttgctgcaaccatatcaacaaatgtcccatgaatgataaggggtaaccatattctcatatatgcatcctcacattaccacatatatatatgtgcatatgtgtatacaggtaaaagtgtgtatatatgtatacatgtatgtttgtgtgtatatacatacatatatcttcacacttttctgaaatatatatatttatgtgagagaagggtctgtactttatttca
前引物：5’- TTGGAAGCCTTACTCTAATAT -3’ 47.6度/ 35％/ 93
后引物：5’- TGAAATAAAGTACAGACCCT -3’ 46.5度 / 35％/ 94
等位基因特异性引物up1：5’-tatatgtgcatatgtgtatacag -3’ 44.6度 / 30.4％ / 82
等位基因特异性引物up2：5’-tatatgtgcatatgtgtatacaa -3’ 44.1度 / 28.1％ / 82
等位基因特异性引物low：5’-atacatatatacacacttttact -3’ 46.1度 / 21.7％ / 89
我佛慈悲 ( 13:38:38)
ttggaagccttactctaatattttggccttgggtctacatttctcagttctgcacagtcattcttcccctctacactactctttagtttgtctcatgattccaatactctcaataattaaccaagaatagaactaatcaatcagataactgtggcacagacatcaaatacattttgctgcaaccatatcaacaaatgtcccatgaatgataaggggtaaccatattctcatatatgcatcctcacattaccacatatatatatgtgcatatgtgtatacaggtaaaagtgtgtatatatgtatacatgtatgtttgtgtgtatatacatacatatatcttcacacttttctgaaatatatatatttatgtgagagaagggtctgtactttatttca
前引物：5’- TTGGAAGCCTTACTCTAATAT -3’ 47.6度/ 35％/ 93
后引物：5’- TGAAATAAAGTACAGACCCT -3’ 46.5度 / 35％/ 94
等位基因特异性引物up1：5’-tatatgtgcatatgtgtatacag -3’ 44.6度 / 30.4％ / 82
等位基因特异性引物up2：5’-tatatgtgcatatgtgtatacaa -3’ 44.1度 / 28.1％ / 82
等位基因特异性引物low：5’-atacatatatacacacttttact -3’ 46.1度 / 21.7％ / 89
我佛慈悲 ( 13:39:01)
以上我特地设计了针对g（下划线，蓝色）的AS-PCR，各参数列出，请教各位站友，有什么需要改进的地方吗？
#甜# ( 13:39:27)
如果带有荧光岂不是更好，我不知道AS－PCR和荧光定量PCR有何区别。&&
XYZQ ( 13:39:52)
一般倒数第三个错配就可以，我看到很多就是这么做的，自己也做了一些，特异性还可以。
只是由于酶的问题（普通的promega 酶），有primer dimer，导致溶解分析时，如果目的片断和非特异扩增的Tm相近，就分不出结果了。
另外想请教一下，末位是A不行吗？
XYZQ ( 13:39:52)
一般倒数第三个错配就可以，我看到很多就是这么做的，自己也做了一些，特异性还可以。
只是由于酶的问题（普通的promega 酶），有primer dimer，导致溶解分析时，如果目的片断和非特异扩增的Tm相近，就分不出结果了。
另外想请教一下，末位是A不行吗？
椰子叶子 ( 13:40:14)
3'-mismatch 末位是A或T都是可以做的，但在这之前如果也是连续3个以上的A和T，那就比较难了。一般引物3’端尽量要避免连续3个以上的A和T。
hammerworker 的前引物就是这样，可能会比较难扩出来。最好换个地方再设计一条forward common primer.&&
@木木@ ( 13:40:33)
请教高手：我的目的基因引物是根据文献设计的，扩增条件也和文献报道一模一样，但是怎么都扩不出来，同样的模板，同样的反应条件，内参和另一目的基因都能扩出来，这到底是怎么回事呀，头疼！
研究僧112 ( 13:40:55)
一:不能全部相信文献,查查序列对吗?用PEIMER软件和BLAST验证引物是否有特异性
二:可以稍微改动反应条件试试,因为PCR稳定性不是很好,条件可能会变,而且你用的试剂不同&&
荷塘青蛙！ ( 13:41:18)
我用BLAST验证过，匹配度100％，这样还要重新设计引物吗？&&
sunshine039 ( 13:41:44)
我也在做这东西，感觉不是很稳定，而且有些位置的引物特异性就是不太好。同时，关于倒数第3个碱基也错配的话，感觉若是扩增质粒或是pcr产物没有问题，但是若拿来扩增基因组，好像不太好扩增。&&
查看完整回复请点击这里：这个是什么意思中文？？？有谁知道_百度知道
这个是什么意思中文？？？有谁知道
提问者采纳
lifenbsp.只要你爱我就好we‘mystery.你从那里来don‘unbsp.我不在乎你过去的种种asnbsp.孤独一直是我的朋友i‘me,宝贝;22don‘hasnbsp.我甚至于不在乎你是否就要逃开it‘outnbsp!me(中英对照)歌手;thatnbsp.但我无法不流露真情blind.朋友说我疯了太盲目itnbsp.你从那里来care.我试着把感情隐藏起来不让任何人知道cominnbsp!我不在乎.当你凝视着我时u‘getnbsp.你是怎样个人wherenbsp.我不在乎
查看原帖&u‘renbsp.所有你说过的话和做过的事feelsnbsp.我以为我们是一对的i‘2nbsp.我就是无法忘了你don‘tnbsp.自从你离开我的生活thingnbsp.你为何能使我如此盲目仍是个谜unbsp.只要你陪在我身边anbsp.我不在乎你是怎样个人lovenbsp.我不在乎你做过什么history.都深深的烙印在我心里doesn‘don‘saynbsp.你做过什么unbsp,只要你爱我就好;u‘u‘u‘glance.激情总是短暂的hownbsp.你做过什么从那里来from:don‘likenbsp,herenbsp,i‘allnbsp.只要你爱我就好whonbsp.只要你爱我就好althoughnbsp只要你爱我就好&can‘unbsp
其他类似问题
为您推荐：
等待您来回答
下载知道APP
随时随地咨询
出门在外也不愁有谁知道这个视频中的两首英文歌叫什么名字？地址是：http:///programs/view/ErytFO427As/_百度知道
有谁知道这个视频中的两首英文歌叫什么名字？地址是：http:///programs/view/ErytFO427As/
记了几句歌词。暂时只留10保底！我只有60分了。在QQ音乐里面也搜过。求大侠帮忙啊，搜网页也没搜出结果，但是在百度歌词里面搜不到。谢谢各位大侠帮我
提问者采纳
google:///music/songEden 莎拉 布莱曼(Sarah Brightman) Weightless 西塞尔(Sissel) <a href="http
非常非常感谢，马上采纳。
提问者评价
很感谢啊，我听出来的歌词是对的，不过在网站上没搜到，找了好久了，谢谢哦。
来自团队：
其他类似问题
为您推荐：
其他3条回答
楼主你好，你开头的第一首曲子我的MP5里面有一首跟你是一模一样的，是莎拉布莱曼的【Eden】，后面一首就是西塞尔的Weightless ~~~~~~~给分啊
【Ellen 你要不要脸了，抄别人歌名还有这么说的，真是作弊投机长大的
英文歌的相关知识
等待您来回答
下载知道APP
随时随地咨询
出门在外也不愁}