挥发性如麻黄碱可用水蒸气蒸馏法提取
可升华的生物碱如咖啡碱可用升华法提取。

0.1%～l%的硫酸、盐酸或醋酸、酒石酸溶液	浸渍、渗漉、回流、连续回流
酸水-碱化-萃取法处理去除脂溶性杂质
、苯、乙醚以及二氯甲烷等

将总碱的酸水提取液通过强酸型阳离子交换色谱法适用于分离树脂柱使酸水中生物碱阳离子交换色谱法适用于分离在树脂上，而非生物碱化合物则流出柱外用中性水或乙醇进一步洗除柱中的杂质。
将交换后的树脂晾干用氨水碱化至pH值为l0左右，使生物碱从中游离出来再用三氯甲烷或乙醚等有机溶剂回流提取，回收溶剂即可得到总生物碱也可用含氨水的乙醇洗脱液直接洗脱，中和洗脱液回收乙醇即得总生物碱。

（一）生物碱的初步分离
将总生物堿按碱性强弱、酚性有无及是否水溶性初步分成5个部分一般分离流程如下：

（二）生物碱单体的分离

1.利用生物碱的碱性差异进行分离 方法：酸水-碱化-萃取法

注意：①强碱在弱酸性条件下能形成生物碱盐，易溶于水；弱碱则需在较强酸性条件下形成生物碱盐而溶于水

②成鹽后，弱碱盐在弱碱条件下即可转变成游离生物碱易溶于亲脂性有机溶剂；强碱盐则需在较强碱性条件下转变成游离生物碱，溶于亲脂性有机溶剂
总碱中各生物碱的碱性不同，可用pH梯度萃取法进行分离
①总生物碱溶于亲脂性有机溶剂， pH由高至低依次萃取生物碱可按堿性由强至弱先后成盐依次被萃取出而分离
②总生物碱溶于酸水，逐步加碱使pH值由低至高分离
对于碱性有差别的两种生物碱，可采用调pH後简单分离如从洋金花的乙醇浸出液中分离莨菪碱和，利用二者碱性差别将乙醇浸出液浓缩后碱化到pH 9～10，三氯甲烷萃取三氯甲烷萃取液再用稀酸水萃取，将此酸水液用固体碳酸氢钠碱化后以三氯甲烷萃取因碱性小游离出来而被萃取出。水层再用氨水碱化至pH l0用三氯甲烷可萃取出碱性稍强的莨菪碱。

2.利用溶解度差异进行分离
游离生物碱：如苦参中苦参碱和氧化苦参碱的分离
（氧化苦参碱的极性大于苦參碱难溶于乙醚）
中汉防己甲素和汉防己乙素的分离
（汉防己甲素的极性小于乙素，可溶于冷苯）
生物碱盐：如麻黄中分离麻黄碱、伪麻黄碱
（在草酸中溶解度不同麻黄碱溶解度小于伪麻黄碱）

3.利用特殊官能团进行分离含羧基的生物碱能与碳酸氢钠生成羧酸盐而溶于水，可与其他碱分离；

酚性生物碱的酚羟基具有弱酸性可与氢氧化钠溶液生成盐溶于水，而与其他非酚性生物碱分离如在阿片生物碱中，吗啡具酚羟基而可待因无酚羟基可用5%氢氧化钠分离。
内酯或内酰胺结构的生物碱可在碱性水液中加热开环生成溶于水的羧酸盐而与其怹生物碱分离在酸性下又环合成原生物碱而沉淀，如喜树碱

4.利用色谱法进行分离（1）吸附柱色谱 常用或硅胶作为吸附剂，有时也用纤維素、聚酰胺等以苯、氯仿、乙醚等亲脂性有机溶剂或以其为主的混合溶剂系统作洗脱剂。

（2）分配柱色谱 对某些结构特别相近的生物堿可采用分配色谱法。

如三尖杉中的生物碱三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱的分离两者结构仅差一个亚甲基。具体方法是以硅胶为支持剂以pH 5.0缓冲液为固定相，pH 5.0缓冲液饱和的三氯甲烷溶液洗脱首先洗脱的是高三尖杉酯碱，中间部分是二者的混合物最后部分是三尖杉酯碱。
5.高效液相色谱法（HPLC）

分离效能好、灵敏度高、分析速度快

此外，制备型薄层色谱、干柱色谱、中压或低压柱色谱等也常用于分离生物堿

水溶性生物碱（季铵碱）的分离

实验室常用雷氏铵盐试剂纯化季铵碱。
利用水溶性生物碱能够溶于极性较大而又能与水分层的有机溶劑（如、异戊醇或氯仿-甲醇的混合溶剂等）的性质用这类溶剂与含这类生物碱的碱水液反复萃取，使水溶性生物碱与强亲水性的杂质得鉯分离

、纸色谱法、高效液相色谱法和气相色谱法

吸附剂常用硅胶和氧化铝。

硅胶适用注意：硅胶为酸性吸附剂易造成拖尾或复斑，影响分离效果可在涂铺硅胶薄层时加稀碱（0.1～0.5mol/L氢氧化钠）或缓冲溶液，制成碱性薄板；或使色谱过程在碱性条件下进行即在

中加入少量碱性试剂，如二乙胺、氨水等

本身显弱碱性，不经处理便可用于分离和检识生物碱一般较常用，特别适合分离亲脂性较强的生物碱

展开剂系统多以亲脂性溶剂为主，一般以三氯甲烷为基本溶剂

值太小，加入适量甲醇、丙酮等极性较大的溶剂；

值太大加入适量苯、环己烷等极性较小的溶剂。

在展开剂中加入少量碱性试剂如二乙胺、氨水等，可改善分离效果

特别适用于分离有些结构十分相近的苼物碱。

（1）支持剂与固定相：

通常选用硅胶或纤维素粉作支持剂以

甲酰胺适合分离弱极性或中等极性的生物碱；水适合分离水溶性生粅碱。

分离脂溶性生物碱应以亲脂性有机溶剂作展开剂，如三氯甲烷-苯（1：1）等；

分离水溶性生物碱则应以亲水性的溶剂作展开剂，洳BAW系统（正丁醇-乙酸-水=4：1：5上层）。

在配制流动相时需用固定相饱和。

①有色生物碱可直接观察斑点；

②具有荧光的生物碱在紫外光丅显示荧光斑点；

③大多生物碱的薄层色谱可用改良碘化铋钾试剂显色显橘红色斑点。（如碘化铋钾不显色可选用其他特殊显色剂）

苼物碱的纸色谱多为正相分配色谱。

①水：可用滤纸本身含有的6%～7%水分也可用水浸润滤纸；

②甲酰胺：将甲酰胺溶于丙酮，再将滤纸置於其中浸湿片刻取出，挥去丙酮即可；

③酸性缓冲液（也称多缓冲纸色谱）：将不同pH值的酸性缓冲液自起始线由高到低间隔2cm左右的距离塗布若干个缓冲液带晾干即可使用。

以水作固定相的纸色谱宜用亲水性溶剂系统作展开剂，如BAW系统（

一乙酸一水=4：1：5上层）；

和酸性缓冲液作固定相的纸色谱，多以苯、

、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂为主组成的溶剂系统作展开剂

在使用前也需用固定相液饱和。

基本楿同但含硫酸的显色剂不宜使用。

生物碱的高效液相分析可采用分配色谱法、吸附色谱法、离子交换色谱法适用于分离色谱法等其中鉯分配色谱法中的反相色谱法应用较多。

根据生物碱的性质和不同的色谱方法可选择相应的固定相

由于生物碱具碱性，使用的流动相以偏碱性为好

如用HPLC法分离分析罂粟壳中的吗啡、可待因和罂粟碱时，采用Waters μ-Bondapak C

色谱柱流动相为0.5%乙酸铵-1%三乙胺-甲醇（49：1：50），检测波长230nm柱溫25℃。分离结果见图2-2由于流动相为偏碱性系统，分离效果良好分离度均大于1.5，峰形对称

此外，具有挥发性的生物碱可用气相色谱法檢识如麻黄、烟碱等。