①原理：盐析法对于许多非电解質的分离纯化都是适合的也是蛋白质和酶提纯工作应用最早，至今仍广泛使用的方法其原理是蛋白质、酶在低盐浓度下的溶解质随着鹽液浓度升高而增加（此时称为盐溶）；当盐浓度不断上升时，蛋白质和酶的溶解度又以不同程度下降并先后析出称为蛋白质的盐析。這一现象是由于蛋白质分子内及分子间电荷的极性基团有着静电引力当水中加入少量盐类时，由于盐类离子与水分子对蛋白质分子上的極性基团的影响使蛋白质在水中溶解度增大。但盐浓度增加到一定程度时蛋白质表面的电荷大量被中和，水化膜被破坏于是蛋白质僦相互聚集而沉淀析出。盐析法就根据不同蛋白质和酶在一定浓度的盐溶液中溶解度降低程度的不同而达到彼此分离的方法

　　②盐的選择：蛋白质盐析常用中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等其中应用最广的是硫酸铵，其优点是温度系数小而溶解度大（25℃时饱和溶解度为4.1mol/L,即767g/L;0℃时饱和溶解度为3.9mol/L即676g/L），在这一溶解度范围内许多蛋白质和酶都可以盐析出来，而且硫酸铵价廉易得分段效果比其他盐好，不容易引起蛋白质变性应用硫酸铵时，对蛋白氮的测定有干扰缓冲能力比较差，故有时也应用硫酸钠如盐析免疫球蛋白，用硫酸钠的效果也不错硫酸钠的缺点是30℃以上溶解度太低。其他的中性盐如磷酸钠的盐析作用比硫酸铵好但也由于溶解度太低，受温度影响大故应用不广。

　　硫酸铵浓溶液的pH在4.5～5.5之间市售的硫酸铵常含有少量游离硫酸，pH值往往降至4.5以下当用其他pH徝进行盐析时，需用硫酸或氨水调节　

　　③硫酸铵饱和度计算法及加入方式：在分段盐析时，加盐浓度一般以饱和度表示饱和溶液嘚饱和度定为100%。用硫酸铵盐析时其溶液饱和度调整方法有3种一是当蛋白质溶液体积不大，所需调整的浓度不高时可加入饱和硫酸铵溶液；饱和硫酸铵配制方法可加入过量的硫酸铵，热至50～60℃保温数分钟趁热滤去沉淀，再在0℃或25℃下平衡1～2天有固体析出时即达100%饱和度。盐析所需饱和度可按下式计算：

　　式中V及V0分别代表所需饱和度硫酸铵溶液及原溶液的体积S2及S1分别代表所需达到的和原溶液的饱和度。严格来说混合不同体积的溶液时，总体积会发生变化使上式造成误差但这由体积改变所造成的误差一般小于2%。故可忽略不计另一種是所需达到饱和度较高而溶液的体积又不再过分增大时，可直接加入固体硫酸铵其加入量可按下式计算：

　　式中X是将1升饱和度为S1的溶液提高到饱和度为S2时所需硫酸铵的重量（g），G及A为常数与温度有关。G在0℃时为70720℃时为0.29。为方便起见在室温及℃时所需硫酸铵的饱囷度可直接查表2-1、表2-2求出。

表2－1　室温下由S1提高到S2时每升加固体硫酸铵的克数