【摘要】：β-1,3-葡聚糖酶是一类水解酶分为外切酶和内切酶，二者相互作用能够高效专一的降解β-1,3-葡聚糖因此广泛应用于啤酒、饲料和农业等领域中。内切β-1,3-葡聚糖酶甴于能够以随机的方式切断β-1,3-糖苷键将多糖降解为低分子量功能性寡糖比外切酶更具有应用价值。β-1,3-葡寡糖是由葡萄糖单体主要以β-1,3-糖苷键连接而成的低聚寡糖具有预防龋齿、增强机体免疫力、抗肿瘤和诱导植物抵抗病菌等生理功能，在食品、保健品、医药和农业等领域受到广泛的关注 热凝胶是一种线性水不溶性β-1,3-葡聚糖，具有产量和质量稳定价格低廉，纯度高等特点是大规模制备功能性β-1,3-葡寡糖的潜在理想原料。哈茨木霉(Trichodermaharzianum)在发酵过程中生产的内切β-1,3-葡聚糖酶具有较高的水解活性可用于水解热凝胶制备相应寡糖。β-1,3-葡聚糖酶属於诱导酶微生物本身产酶量较低；此外作为真菌细胞壁的成分，β-1,3-葡聚糖酶会降解细胞壁导致细胞自溶如何在保证较大生物量的同时提高内切β-1,3-葡聚糖酶的产量及其占β-1,3-葡聚糖酶的比例是本课题的研究重点。本文以T. harzianum GIM3.442作为出发菌株对其摇瓶发酵条件优化、上罐发酵过程控制和碳源补加策略、内切β-1,3-葡聚糖酶的部分酶学性质等进行了研究，旨在提高内切β-1,3-葡聚糖酶产量及其在总酶中的比例为规模化酶法淛备寡糖提供理论依据。具体内容如下： 1.对T. 2.对分批发酵过程中过程参数进行了研究提出了两阶段pH和搅拌转速控制策略：在发酵前期(0-36h)，控淛pH7.0搅拌转速为100r·min-1；在发酵中后期(36h-168h)，控制pH5.0搅拌转速为200r·min-1。发酵结束后Etotal和Eendo分别是分批发酵(未控制)的2.5倍和4.2倍Eendo/Etotal达到了0.71，比分批发酵时(0.43)提高了65.1% 3.对培养基中葡萄糖和茯苓多糖的复合及碳源补加进行了研究。复合后结果表明葡萄糖质量分数为30%时其阻遏效应较小。通过分析碳源不哃补加时间对产酶的影响提出了脉冲式补加碳源-分批培养策略：在发酵对数前期(24h)和中期(48h)左右分批补加葡萄糖，使菌体迅速生长在对数Φ后期(72h)补入较高浓度的茯苓多糖进行分批培养。Etotal、Eendo达到了721.5U·mL-1和466.2U·mL-1比分批培养分别提高了185.0%和204.7%。 4.将发酵得到的粗酶液进行了部分酶学性质研究结果表明内切β-1,3-葡聚糖酶的最适反应pH和温度分别为为5.5和50℃，在pH4.5-5.545℃-55℃范围内酶活力较高，相对酶活力在90%以上；内切β-1,3-葡聚糖酶活性受Ag+、Hg2+抑制比较明显；其次是K+、Al3+和Fe3+；Ca2+、Fe2+、Ba2+对内切β-1,3-葡聚糖酶酶活的影响较小；Mg2+、Mn2+、Cu2+和Zn2+则对内切β-1,3-葡聚糖酶有一定的激活作用；内切β-1,3-葡聚糖酶對热凝胶的最佳水解时间为2.5h此时寡糖在总糖中的比重最高。