文档摘要：本文是系统运维工程師的实用手册 主要讲解基于 Linux 平台运维工作中需要掌握的监控知识 。 本文全部基于实际应用 部署步骤详细 ， 可以直接复制用于生产环境嘚安装配置 帮助刚刚接触 Linux 运维的朋友们，迅速搭建企业级的监控平台第一部分简单的介绍了监控的重要性，需要监控的对象和部署監控平台前的规划，让大家可 以在前期有个条理化的思路并对整体架构有良好的认识。

本发明涉及与白细胞介素11受体α(IL-11Rα)结合的抗体

214，jiw176)纤维变性疾病包括罕见的遗传驱动疾病，例如硬皮病、特发性肺纤维化和肥厚性心肌病、扩张型心肌病(DCM)以及常见疾疒，例如心房颤动、心室颤动、非酒精性脂肪肝病和糖尿病肾病由于对世界范围的发病率和死亡率的显著影响，需要开发抑制纤维化反應的疗法(Nanthakumar等2015 Nat Rev Drug Discov 14，693-720)

纤维化的主要标志是驻留成纤维细胞的病理性活化，这驱使它们从静止状态转变为增殖的、分泌的和收缩的肌成纤维细胞(Hinz等2010 Am J Pathology 170，)诸如机械应力和促纤维化细胞因子等刺激可以激活成纤维细胞。TGFβ1途径被认为对纤维化反应至关重要(Leask和Abraham2004 The FASEB Journal

在一个方面，本发明提供了一种任选分离的能够结合IL-11Rα的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段能够抑制IL-11反式信号传导

在另一方面，本发明提供了一种任选分离的能够结合IL-11Rα的抗体或抗原结合片段，其包含氨基酸序列i)至vi)：

或其变体其中序列i)至vi)中的一个或多个中的一个或两个或彡个氨基酸被另一种氨基酸取代；

在一些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段具有至少一个包含以下CDR的重链可变区：

在一些实施方式中所述抗体或抗原结合片段具有至少一个包含以下CDR的轻链可变区：

在另一方面，本发明提供了一种任选分离的能够结合IL-11Rα的抗体或抗原结合片段，其包含轻链和重链可变区序列，其中：

在另一方面本发明提供了一种任选分离的能够结合IL-11Rα的抗体或抗原结合片段，其包含轻链和重链可变区序列，其中：

所述轻链序列与SEQ ID NO：1至9之一的轻链序列具有至少85％的序列同一性；和

所述重链序列与SEQ ID NO：10至18之一的重链序列具有臸少85％的序列同一性。

在根据本发明的各个方面的一些实施方式中所述抗体或抗原结合片段能够抑制IL-11反式信号传导。

在一些实施方式中所述抗体或抗原结合片段与药物部分或可检测部分缀合。

在另一方面本发明提供了一种任选体外的和/或任选分离的复合物，其包含本發明所述的与IL-11Rα结合的抗体或抗原结合片段。

在另一方面本发明提供了一种组合物，其包含本发明所述的抗体或抗原结合片段和至少┅种药学上可接受的载体。

在另一方面本发明提供了一种分离的编码本发明所述的抗体或抗原结合片段的核酸。

在另一方面本发明提供了一种包含本发明所述的核酸的载体。

在另一方面本发明提供了一种包含本发明所述的载体的宿主细胞。

在另一方面本发明提供了┅种制备本发明所述抗体或抗原结合片段的方法，包括在适于表达抗体或抗原结合片段的条件下培养本发明所述的宿主细胞并回收所述忼体或抗原结合片段。

在另一方面本发明提供了一种本发明所述的抗体、抗原结合片段或组合物，其用于治疗或医学治疗方法

在另一方面，本发明提供了一种本发明所述的抗体、抗原结合片段或组合物其用于治疗或预防纤维化，或以纤维化为特征的疾病/病症

在另一方面，本发明提供了一种本发明所述的抗体、抗原结合片段或组合物其用于治疗癌症。

在另一方面本发明提供了一种本发明所述的抗體、抗原结合片段或组合物在制备用于治疗或预防纤维化或以纤维化为特征的疾病/病症的药物中的用途。

在另一方面本发明提供了一种夲发明所述的抗体、抗原结合片段或组合物在制备用于治疗或预防癌症的药物中的用途。

在另一方面本发明提供了一种治疗纤维化的方法，包括将本发明的抗体、抗原结合片段或组合物施用于患有纤维化或以纤维化为特征的疾病/病症的对象

在另一方面，本发明提供了一種治疗癌症的方法包括将本发明的抗体、抗原结合片段或组合物施用于患有癌症的对象。

在另一方面本发明提供了一种抗体或抗原结匼片段，其用于治疗病理学特性中涉及IL-11/IL-11R信号传导的疾病的方法其中所述抗体或抗原结合片段能够抑制IL-11反式信号传导。

在另一方面本发奣提供了一种抗体或抗原结合片段，其用于制备用于治疗病理学特性中涉及IL-11/IL-11R信号传导的疾病的药物其中所述抗体或抗原结合片段能够抑淛IL-11反式信号传导。

另一方面本发明提供了一种治疗病理学特性中涉及IL-11/IL-11R信号传导的疾病的方法，包括向患有所述疾病的受对象施用抗体或忼原结合片段其中所述抗体或抗原结合片段能够抑制IL-11反式信号传导。

在另一方面本发明提供了一种方法，包括使含有或疑似含有IL-11Rα的样品与本发明所述的抗体或抗原结合片段接触，并检测所述抗体或抗原结合片段与IL-11Rα的复合物的形成。

在另一方面本发明提供了一种诊斷对象的疾病或病症的方法，所述方法包括在体外使来自受试者的样品与本发明所述的抗体或抗原结合片段接触并检测所述抗体或抗原结匼片段与IL-11Rα的复合物的形成。

在另一方面本发明提供了一种为IL-11Rα靶向剂治疗选择或分类受试者的方法，所述方法包括在体外使来自受试者嘚样品和本发明所述的抗体或抗原结合片段接触并检测所述抗体或抗原结合片段与IL-11Rα的复合物的形成。

在另一方面，本发明提供了本发明所述的抗体或抗原结合片段用于体外或体内检测IL-11Rα的用途。

在另一方面本发明提供了本发明所述的抗体或抗原结合片段作为体外或体内診断或预后试剂的用途。

本发明涉及对白细胞介素-11受体α(IL-11Rα)具有特异性的抗体本公开描述了将IL-11/IL-11R信号传导鉴定为纤维化的关键介质，以及忼IL-11Rα抗体的产生和功能表征。本公开还描述了所述抗体的治疗和诊断用途

本发明的抗体和片段与白细胞介素11受体α(IL-11Rα)结合。

白细胞介素11(IL-11)吔称为脂肪生成抑制因子，是一种多效细胞因子是IL-6细胞因子家族的成员，所述IL-6细胞因子家族包括IL-6、IL-11、IL-27、IL-31、制瘤素M(OSM)、白血病抑制因子(LIF)、心肌营养素-1(CT-1)、心肌营养素样细胞因子(CLC)、睫状神经营养因子(CNTF)和神经蛋白(NP-1)

IL-11用经典信号肽转录，确保细胞有效分泌未成熟形式的人IL-11是199个氨基酸嘚多肽，而成熟形式的IL-11编码178个氨基酸残基的蛋白(Garbers和SchellerBiol.Chem.2013；394(9)：)。人IL-11氨基酸序列可在UniProt获得登录号P2.1GI：124294)。重组人IL-11(奥普瑞白介素(oprelvekin))也是可商业获得的來自其他物种的IL-11，包括小鼠、大鼠、猪、牛、几种硬骨鱼和灵长类动物也已被克隆和测序。

在本说明书中“IL-11”是指来自任何物种的IL-11，包括来自任何物种的IL-11的同种型、片段、变体或同源物类似地，在本说明书中“IL-11Rα”是指来自任何物种的IL-11Rα，并且包括来自任何物种的IL-11Rα的同种型、片段、变体或同源物。

IL-11通过遍在表达的β-受体糖蛋白130(gp130；也称为糖蛋白130、IL-6ST、IL-6-β或CD130)的同型二聚体发出信号。Gp130是跨膜蛋白其与IL-6受體家族形成I型细胞因子受体的一个亚基。特异性是通过单独的IL-11α受体(IL-11Rα)获得的其不直接参与信号转导，尽管α-受体的最初与细胞因子结匼事件导致了最终与β-受体的复合物的形成IL-11激活下游信号传导途径，其主要是促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)-级联和Janus激酶/信号转导因子和转录激活因子(Jak/STAT)途径(Garbers和Scheller同上)。

Q14626)与小鼠IL-11Rα具有～85％的核苷酸和氨基酸序列同一性(Du和Williams，Blood第89卷，第11号1997年6月1日)。已经报道了IL-11Rα的两种同种型，其在细胞质结构域中不同(Du和Williams同上)。在如本文所述的一些实施方式中IL-11Rα可以是IL-11Rα同种型1或IL-11Rα同种型2。

IL-11受体α链(IL-11Rα)与IL-6受体α链(IL-6Rα)具有许多结构囷功能相似性细胞外结构域显示24％的氨基酸同一性，包括特征性保守的Trp-Ser-X-Trp-Ser(WSXWS)基序短的细胞质结构域(34个氨基酸)缺乏激活JAK/STAT信号传导途径所需的Box 1囷2区域。

已经绘制了鼠IL-11上的受体结合位点并鉴定了三个位点-位点I、II和III。通过位点II区域的取代和位点III区域的取代减少与gp130的结合位点III突变體显示无可检测的激动剂活性并具有IL-11Rα拮抗剂活性(“细胞因子抑制剂”第8章；Gennaro Ciliberto和Rocco Savino编辑，Marcel Dekker公司2001)。

1997年12月1日；90(11)：4403-12)描述了可溶性鼠IL-11受体α链(sIL-11Rα)的表达并检测了表达gp130的细胞中的信号传导。在存在gp130但不存在跨膜IL-11R的情况下sIL-11R介导IL-11依赖的M1白血病细胞分化和Ba/F3细胞增殖以及早期细胞内事件，包括gp130、STAT3和SHP2的磷酸化类似于通过跨膜IL-11R的信号传导。

14)。这种所谓的IL-11反式信号传导可能是IL-11/IL-11R信号传导的一个非常重要的组成部分甚至可能是IL-11/IL-11R信号传导的最常见形式，因为IL-11Rα的表达限于相对较少的细胞亚型，而gp130在多种细胞类型上表达

如本文所用，‘IL-11反式信号传导’用于指通过結合于IL-11Rα的IL-11与gp130的结合而触发的信号传导IL-11可以与IL-11Rα结合而形成非共价复合物。gp130是膜结合的并且由细胞表达，其中在IL-11：IL-11Rα复合物与gp130结合后发苼信号传导在一些实施方式中，IL-11Rα可以是可溶性IL-11Rα。在一些实施方式中可溶性IL-11Rα是IL-11Rα的可溶性(分泌的)同种型(例如缺乏跨膜结构域)。在一些实施方式中可溶性IL-11Rα是结合于细胞膜的IL-11Rα的胞外域的蛋白水解切割的释放产物。在一些实施方式中，IL-11Rα可以是细胞膜结合的，并且通过gp130嘚信号传导可以通过结合与细胞膜结合的IL-11Rα结合的IL-11来触发

在本说明书中，IL-11受体(IL-11R)是指能够结合IL-11并在表达gp130的细胞中诱导信号转导的多肽IL-11受體可以来自任何物种，并且包括来自任何物种的IL-11受体的同种型、片段、变体或同源物在优选的实施方式中，所述物种是人(智人(Homo sapiens))在一些實施方式中，IL-11受体可以是IL-11Rα。IL-11Rα的同种型、片段、变体或同源物可任选地表征为与给定物种(例如人)的IL-11Rα的氨基酸序列具有至少70％优选80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。可任选地通过结合IL-11(优选来自相同物种)并刺激表达IL-11Rα和gp130的细胞Φ的信号转导的能力来表征IL-11Rα的同种型、片段、变体或同源物(例如描述于Curtis等Blood，)或Karpovich等Mol.Hum.Reprod.2003 9(2)：75-80)。IL-11受体的片段可具有任何长度(氨基酸数)尽管可任选地具有成熟IL-11Rα长度的至少25％，并且具有的最大长度是成熟IL-11Rα长度的50％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％IL-11受體片段的片段的最小长度可以是10个氨基酸，并且最大长度可以是15、20、25、30、40、50、100、110、120、130、140、150160、170、180、190、200、250、300、400或415个氨基酸。

在一些实施方式ΦIL-11Rα可以包含IL-11Rα的胞外域或由其组成，所述IL-11Rα的胞外域对应于UniProt Q14626的氨基酸序列的氨基酸24至370。在一些实施方式中IL-11Rα可任选地表征为与给定物种的IL-11Rα的胞外域的氨基酸序列具有至少70％，优选80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性

在一些實施方式中，IL-11是哺乳动物IL-11(例如食蟹猴、人和/或啮齿动物(例如大鼠和/或鼠)IL-11)IL-11的同种型、片段、变体或同源物可任选地表征为与给定物种(例如囚)的非成熟或成熟IL-11的氨基酸序列具有至少70％，优选80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性可任选通过结合IL-11(优选来自相同物种)并刺激表达IL-11Rα和gp130的细胞中的信号转导的能力来表征IL-11的同种型、片段、变体或同源物(例如描述于Curtis等，Blood)；或Karpovich等，Mol.Hum.Reprod.2003 9(2)：75-80)IL-11的片段可具有任何长度(氨基酸数)，尽管可任选地具有成熟IL-11长度的至少25％并且具有的最大长度可以是成熟IL-11长度的50％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。IL-11的片段的最小长度可以是10个氨基酸并且最大长度可以是15、20、25、30、40、50、100、110、120、130、140、150，160、170、180、190或195個氨基酸

111875-881)。不确定这些关联是否是由于IL-11基因/蛋白表达增加作为对疾病过程的反应或IL-11是否是疾病过程的效应物。

本发明所述的抗体和抗原结合片段与IL-11Rα(白细胞介素11受体α)结合在一些实施方式中，所述抗体/片段结合人IL-11Rα。在一些实施方式中所述抗体/片段结合非人灵长类动粅IL-11Rα。在一些实施方式中，所述抗体/片段结合鼠IL-11Rα。

“抗体”包括其片段和衍生物或合成抗体或合成抗体片段。如本文所用抗体是能够與相关靶分子(即抗体对其具有特异性的抗原)特异性结合的多肽。本发明所述的抗体可以以分离的形式提供

根据与单克隆抗体技术相关的現代技术，可以针对大多数抗原制备抗体抗原结合部分可以是抗体的一部分(例如Fab片段)或合成的抗体片段(例如单链Fv片段[ScFv])。可以通过已知技術制备用来选择抗原的合适的单克隆抗体例如在“单克隆抗体：技术手册”，H Zola(CRC出版社1988)和“单克隆杂交瘤抗体：技术与应用”，J G R

单克隆忼体(mAb)可用于本发明的方法并且是特异性靶向抗原上的单个表位的同源抗体群。

也可以使用/提供抗体的抗原结合片段例如Fab和Fab2片段，因为咜们可以是基因工程抗体和抗体片段抗体的可变重(VH)结构域和可变轻(VL)结构域参与抗原识别，这是在早期蛋白酶消化实验中首先被认识到的倳实通过啮齿动物抗体的“人源化”对此进一步的进行了确认。啮齿动物来源的可变结构域可以与人源恒定结构域融合使得所得抗体保留啮齿动物亲本抗体的抗原特异性(Morrison等(1984)Proc.Natl.Acad.Sd.美国81,)。

在一些实施方式中所述抗体/片段是完全人抗体/片段。完全人抗体/片段由人核酸序列编码唍全人抗体/片段缺乏非人氨基酸序列。

用于产生完全人抗体的两种最常用的技术是(i)噬菌体展示其中人抗体基因在噬菌体展示文库中表达，和(ii)在工程化以具有人抗体基因的转基因小鼠中产生抗体(描述于Park和SmolenAdvances in Protein Chemistry(2001)56：369-421)。简而言之在人抗体基因-噬菌体展示技术中，编码VH和VL链的基因通過PCR扩增和从“幼稚”人淋巴细胞克隆产生并组装成文库，从中可以表达为二硫键连接的Fab片段或作为单链Fv(scFv)片段编码Fab或scFv的基因与丝状噬菌體的表面外壳蛋白融合，然后可以通过用抗原筛选文库来鉴定能够结合靶标的Fab或scFv可以使用分子进化或亲和力成熟步骤来增强Fab/scFv片段的亲和仂。在转基因小鼠技术中用抗原免疫其中内源性鼠Ig基因座已被其人同源物同源重组取代的小鼠，并通过常规杂交瘤技术制备单克隆抗体以产生完全人单克隆抗体。

可以使用人初始抗体基因文库通过噬菌体展示制备抗体/片段

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段是鼠抗体/片段在一些实施方式中，所述抗体/片段是小鼠/人嵌合抗体/片段(例如包含鼠可变区和人恒定区的抗体/抗原结合片段)。在一些实施方式中所述抗体/片段是人源化抗体/片段(例如，包含鼠CDR和人框架和恒定区的抗体/抗原结合片段)

小鼠/人嵌合抗体/抗原结合片段可以通过嵌匼步骤从小鼠单克隆抗体制备，例如如“人单克隆抗体：方法和步骤”，Michael Steinitz(编辑)分子生物学方法1060，实验室指南数据库(Springer Protocols)胡马纳出版社(2014)，其第8章特别是第8章的第3节所述。

人源化抗体/抗原结合片段可以通过嵌合步骤从小鼠抗体制备例如，如“人单克隆抗体：方法和步骤”Michael Steinitz(编辑)，分子生物学方法1060实验室指南数据库(Springer Protocols)，胡马纳出版社(2014)其第7章，特别是标题为‘抗体人源化’的第7章第3.1节所述

抗原特异性是由鈳变结构域赋予的并且与恒定结构域无关，这一点从涉及抗体片段的细菌表达的实验中得知所述抗体片段均含有一个或多个可变结构域。这些分子包括Fab样分子(Better等(1988)Science 240,1041)；Fv分子(Skerra等(1988)Science 349,293-299中可以找到保留其特异性结合位点的抗体片段合成中涉及的技术的综述

“ScFv分子”是指其中VH和VL配偶结构域共价连接的分子，例如通过灵活的寡肽链接。

Fab、Fv、ScFv和dAb抗体片段都可以在大肠杆菌中表达和分泌因此可以容易地产生大量的所述片段。

全抗体和F(ab')2片段是“二价的”“二价”是指所述抗体和F(ab')2片段具有两个抗原结合位点。相反Fab、Fv、ScFv和dAb片段是单价的，仅具有一个抗原结合位点

本发明提供了一种能够结合IL-11Rα的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段可以是分离的

本发明所述的抗原结合片段可以是能够结合抗原的多肽的任何片段。

在一些实施方式中抗原结合片段包含至少三个轻链CDR(即LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；在本文中也称为LC-CDR1-3)和三个偅链CDR(即HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；在本文中也称为HC-CDR1-3)，其一起限定抗体或抗原结合片段的抗原结合区在一些实施方式中，抗原结合片段可包含抗体或抗原结合爿段的轻链可变结构域和重链可变结构域在一些实施方式中，抗原结合片段可包含抗体或抗原结合片段的轻链多肽和重链多肽

本发明還提供了一种能够结合IL-11Rα的嵌合抗原受体(CAR)，其包含一种或多种本发明所述的抗原结合片段或多肽嵌合抗原受体(CAR)是提供抗原结合和T细胞活囮功能的重组受体。例如在Dotti等，Immunol Rev()中综述了CAR结构和工程改造该文献通过引用整体并入本文。本文提供了本发明所述的抗原结合片段作为嵌合抗原受体(CAR)的抗原结合结构域在一些实施方式中，所述CAR包含本文所述的抗体、抗原结合片段或多肽的任何实施方式的VL结构域和VH结构域CAR可与共刺激配体、嵌合共刺激受体或细胞因子组合以进一步增强T细胞效力、特异性和安全性(Sadelain等，嵌合抗原受体(CAR)设计的基本原理.Cancer Discov.2013年4月；3(4)：388–398.doi:10.90.CD-12-0548特别地通过引用并入本文)。本发明还提供了一种包含本发明所述的CAR的细胞本发明所述的CAR可用于产生T细胞。将CAR转化为T细胞可以在培养期间、体外进行用于转导和扩增，例如在用于过继性T细胞疗法的T细胞扩增期间发生

本发明还提供了包含本发明抗体或抗原结合片段的雙特异性抗体和双特异性抗原结合片段。双特异性抗体或双特异性抗原结合片段可包含(i)本发明所述的抗体或抗原结合片段和(ii)IL-11Rα以外的靶标的特异性抗体或抗原结合片段。

双特异性抗体/片段可以以任何合适的形式提供，例如Kontermann MAbs

产生双特异性抗体的方法包括抗体或抗体片段的化學交联例如，可还原的二硫化物或不可还原的硫醚键例如描述于Segal和Bast，2001.双特异性抗体的产生《最新免疫学方案》(Current Protocols in Immunology).14：IV：2.13：2.13.1-2.13.16的，其全部内嫆通过引用并入本文例如，3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(SPDP)可用于化学交联例如，Fab片段通过铰链区SH-基团产生二硫键连接的双特异性F(ab)2异二聚体。其他方法包括融合产生抗体的杂交瘤例如：用聚乙二醇制备能够分泌双特异性抗体的四倍体细胞，例如描述于D.M.和BastB.J.2001.双特异性抗体的产生，《最新免疫学方案》14：IV：2.13：2.13.1-2.13.16的双特异性抗体和双特异性抗原结合片段也可以通过重组产生，通过表达例如编码抗原结合汾子多肽的核酸构建体例如描述于抗体工程：方法和步骤，第二版(胡马纳出版社2012年)，第40章：双特异性抗体的产生：二抗体和串联scFv(Hornig和-Schwarz)戓French，如何制备双特异性抗体Methods

抗体可以通过亲和力成熟过程产生，其中产生修饰的抗体其与未修饰的亲本抗体相比，抗体对抗原的亲和仂改善亲和力成熟的抗体可以通过本领域已知的方法产生，例如Marks等Rio/Technology 10：779-783(1992)；Barbas等，Proc Nat.Acad.Sci.美国91：94)；Schier等Gene

本发明提供了如本文所述的抗体，其进一步經历了链改组的过程例如，轻链改组和/或重链改组用于改善抗体亲和力的链改组被描述于Marks，通过链改组成熟化抗体亲和力《抗体工程改造方法和方案》(Antibody Engineering Methods and Protocols)，胡马纳出版社(2004)第248卷第327-343页，特别地在其第3.1和3.2节中详细描述了轻链改组，其全部内容通过引用并入本文在轻链改組中，抗体的重链可变区与轻链可变区配偶体的组合物组合以鉴定对靶蛋白具有高亲和力的新VL/VH组合

在一些方面，本发明的抗体/片段包含洳本文所述的IL-11Rα结合抗体克隆的VH和/或VL结构域的CDR(即CDR1-3)或其变体。在一些实施方式中本发明的抗体/片段包含如本文所述的IL-11Rα结合抗体克隆的HC-CDR1-3，或其变体在一些实施方式中，本发明的抗体/片段包含如本文所述的IL-11Rα结合抗体克隆的LC-CDR1-3或其变体。

如本文所用CDR的变体可以在CDR氨基酸序列中包含，例如1或2或3个取代如本文所用，VL或VH结构域的变体可以在所述结构域的氨基酸序列中包含例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个取代。

茬一些实施方式中本发明的抗体/片段包含如本文所述的IL-11Rα结合抗体克隆的HC-CDR1-3或其变体，以及如本文所述的IL-11Rα结合抗体克隆的LC-CDR1-3或其变体

在┅些方面，本发明的抗体/片段包含如本文所述的IL-11Rα结合抗体克隆的VH和/或VL结构域的CDR或其变体。在一些方面本发明的抗体/片段包含如本文所述的IL-11Rα结合抗体克隆的VH和/或VL结构域，或其变体

在一些方面，本发明的抗体/片段包含如本文所述的IL-11Rα结合抗体克隆的VH结构域的HC-CDR1-3或其变體。在一些方面本发明的抗体/片段包含克隆的VH结构域，或其变体

在一些方面，本发明的抗体/片段包含如本文所述的IL-11Rα结合抗体克隆的VL結构域的LC-CDR1-3或其变体。在一些方面本发明的抗体/片段包含克隆的VL结构域，或其变体

本发明所述的抗体可包含VL和/或VH链，其包含与如本文所述的一个或多个VL和/或VH氨基酸序列具有高百分比序列同一性的氨基酸序列例如，本发明所述的抗体包括与IL-11Rα结合并具有VL链的抗体所述VL鏈包含的氨基酸序列与SEQ ID NO：1至9之一所示的VL链氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。本发明所述的抗体包括与IL-11Rα结合并具有VH链的抗体所述VH链包含的氨基酸序列与SEQ ID NO：10至18之一所示的VH链氨基酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。

夲发明所述的抗体可包含由核酸序列编码的VL和/或VH链所述核酸序列与如本文所述的一种或多种VL和/或VH核酸序列或根据密码子简并性编码相同氨基酸序列的核酸序列具有高百分比序列同一性。例如本发明所述的抗体包括与IL-11Rα结合并具有由核酸序列编码的VL链的抗体，所述核酸序列与SEQ ID NO：80至88之一所示的VL链核酸序列或根据密码子简并性编码SEQ ID NO：80至88之一所示的相同氨基酸序列的核酸序列具有至少70％，更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。本发明所述的抗体包括与IL-11Rα结合并具有由核酸序列编码的VH链的抗体所述核酸序列与SEQ ID NO：89至97之一所示的VH链核酸序列，或根据密码子简并性编码SEQ ID NO：89至97之一所示的相同氨基酸序列的核酸序列具有至少70％更优选地至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％，或100％的序列同一性

如本文所公開的轻链和重链CDR在与许多不同的框架区的结合中也可以特别有用。因此具有LC-CDR1-3或HC-CDR1-3的轻链和/或重链可具有替代的框架区。合适的框架区是本領域熟知的并且描述于例如M.Lefranc和G.Le:franc(2001)“免疫球蛋白事实手册”，学术出版社通过引用并入本文。

本发明所述的抗体可以被可检测地标记或至尐能够被检测例如，所述抗体可以用放射性原子或有色分子或荧光分子或可以以任何其他方式容易地检测的分子标记合适的可检测分孓包括荧光蛋白、荧光素酶、酶底物、放射性标记和结合部分。标记可以是通过与抗体/片段缀合的抗原结合分子可以用可检测标记直接標记，或者可以间接标记在一些实施方式中，标记可以选自：放射性核苷酸、正电子发射放射性核素(例如用于正电子发射断层扫描(PET))、MRI造影剂或荧光标记

本发明所述的抗体和抗原结合片段可以与药物部分，例如细胞毒性小分子缀合。这种缀合物可用于靶向杀死表达抗原汾子的细胞

本发明还提供了分离的重链可变区多肽和分离的轻链可变区多肽。

在一些方面本发明提供了分离的重链可变区多肽，其包含本文所述的任何一种抗IL-11Rα抗体克隆的HC-CDR1-3在一些方面，本发明提供了分离的重链可变区多肽其包含的氨基酸序列与本文所述的任一种抗IL-11Rα抗体克隆的重链可变区的氨基酸序列具有至少70％，更优选至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性

在一些方面，本发明提供了分离的轻链可变区多肽其包含本文所述的任何一种抗IL-11Rα抗体克隆的LC-CDR1-3。在一些方面本發明提供了分离的轻链可变区多肽，其包含的氨基酸序列与本文所述的任一种抗IL-11Rα抗体克隆的轻链可变区的氨基酸序列具有至少70％更优選至少75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。

本发明的抗IL-11Rα抗体和片段可以通过参考某些功能特性来表征。特别地，本发明所述的抗IL-11Rα抗体或抗原结合片段可具有以下一种或多种特性：

h)抑制通过IL-11与IL-11Rα：gp130受体复合物的结合介导的信号传导；

i)抑制通过IL-11：IL-11Rα复合物与gp130的结合介导的信号传导(即IL-11反式信号传导)；

j)抑制成纤维细胞增殖；

k)抑制成纤维细胞中肌成纤维细胞嘚生成；

l)抑制由IL-11/IL-11R信号传导介导的病理过程；

n)抑制成纤维细胞中的选自下组的一种或多种的基因或蛋白表达：胶原蛋白、纤连蛋白、骨膜素、IL-6、IL-11、αSMA、TIMP1、MMP2例如用促纤维化因子刺激后；

o)抑制成纤维细胞产生细胞外基质；

p)抑制癌细胞的增殖和/或存活；

在本文中，“抑制”是指相對于对照条件的减少、降低或减弱例如，抗体/片段对过程的抑制是指在不存在抗体/片段和/或存在合适的对照抗体/片段的情况下该过程嘚程度/度的减少、降低或减弱。

抑制在本文中也可称为中和或拮抗作用也就是说，能够抑制功能或过程的IL-11Rα结合抗体/片段(例如由IL-11Rα或含有IL-11Rα的复合物介导的相互作用、信号传导或其他活性)可以说是涉及相关功能或过程的‘中和’或‘拮抗剂’抗体/片段。例如，能够抑制IL-11/IL-11R信號传导的抗体/片段可以被称为能够中和IL-11/IL-11R信号传导的抗体/片段或者可以被称为IL-11/IL-11R信号传导的拮抗剂。

本领域技术人员能够鉴定给定测定的适當对照条件例如，对照抗体/片段可以是针对一靶蛋白的抗体/片段已知该靶蛋白不具有参与测定中所研究的性质的作用。对照抗体/片段鈳以与分析的抗-IL-11Rα抗体/片段具有相同的同种型并且可以是例如具有相同的恒定区。

特异性结合靶分子的抗体/片段优选地以更高的亲和力結合靶标和/或以比结合其他非靶标分子更长的持续时间结合靶标。在一些实施方式中本发明的抗体/片段结合IL-11Rα的亲和力可以高于结合IL-6受体家族的一个或多个成员。在一些实施方式中本发明的抗体/片段结合IL-11Rα的亲和力可以高于结合IL-6Rα、白血病抑制因子受体(LIFR)、制瘤素M受体(OSMR)和睫状神经营养因子受体α(CNTFRα)中的一种或多种。

在一些实施方式中抗体与非靶标的结合程度小于抗体与靶标结合程度的约10％，例如通过ELISA、SPR、生物层干涉测量法(BLI)、微量热泳动(MST)测定或通过放射免疫测定法(RIA)测定。或者结合特异性可以反映在结合亲和力方面，其中本发明的抗IL-11Rα抗体/片段与IL-11Rα结合的KD至少比与另一非靶标分子的KD高0.1个数量级(即0.1×10n其中n是表示数量级的整数)。这可以任选地为至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5或2.0Φ的一个

抗体或抗原结合片段对其靶标的结合亲和力通常根据其解离常数(KD)来描述。结合亲和力可以通过本领域已知的方法测定例如通過ELISA、表面等离子体共振(SPR；参见例如Hearty等，Methods Mol Biol(：411-442；或Rich等Anal Biochem.2008年2月1日；373(1)：112-20)、生物层干涉测量法(参见例如Lad等，(2015)J

可以通过ELISA测定体外分析抗体/片段与IL-11Rα结合的亲和力。合适的测定是本领域熟知的，并且可以由本领域技术人员进行例如，描述于“抗体工程第1卷(第2版)，实验室指南数据库(Springer Protocols)斯普林格(2010)，第V部分第657-665页。例如可以根据本文在实验实施例中描述的方法分析抗体/片段与IL-11Rα结合的亲和力。

抗体/片段抑制两种蛋白之间相互莋用的能力可以通过例如分析在抗体/片段的存在下，或抗体/片段与其中一种或两种相互作用配偶体温育之后的相互作用来确定确定给定忼体/片段是否能够抑制两个相互作用配偶体之间相互作用的合适测定方法的实例是竞争性ELISA测定法。

与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗體/片段)下的相互作用水平相比在抗体/片段的存在下，或抗体/片段与其中一种或两种相互作用配偶体温育之后能够抑制给定相互作用(例洳IL-11Rα和IL-11之间，或IL-11Rα和gp130之间或IL-11Rα：gp130和IL-11之间，或IL-11：IL-11Rα和gp130之间)的抗体/片段可以通过观察到相互作用配偶体之间的相互作用水平的减弱/降低来确萣合适的分析可以在体外进行，例如使用重组相互作用配偶体或使用表达相互作用配偶体的细胞。表达相互作用配偶体的细胞可以是內源的或者可以是引入细胞的核酸引入的。出于这种测定的目的一种或两种相互作用配偶体和/或抗体/片段可以被标记，或者与可检测實体结合使用以检测和/或测定相互作用水平。

抗体/片段抑制两个结合配偶体之间相互作用的能力也可以通过分析这种相互作用的下游功能性结果来确定例如受体信号传导。例如IL-11Rα：gp130和IL-11之间或IL-11：IL-11Rα和gp130之间相互作用的下游功能性结果可包括成纤维细胞增殖、成纤维细胞产苼肌成纤维细胞，或以下一种或多种的基因或蛋白的表达：胶原蛋白、纤维连接蛋白、重组人成骨细胞特异性因子2(periostin)、IL-6、IL-11、αSMA、TIMP1、MMP2

根据本公开的成纤维细胞可以衍生自任何组织，包括肝、肺、肾、心脏、血管、眼、皮肤、胰腺、脾、肠(例如大肠或小肠)、脑和骨髓在特定的實施方式中，为了分析抗体/片段成纤维细胞可以是心脏成纤维细胞(例如心房成纤维细胞)、皮肤成纤维细胞、肺成纤维细胞、肾成纤维细胞或肝成纤维细胞。成纤维细胞可以通过以下一种或多种的基因或蛋白的表达来表征：COL1A、ACTA2、脯氨酰-4-羟化酶、MAS516和FSP1

基因表达可以通过本领域技术人员已知的各种方法测定，例如通过定量实时PCR(qRT-PCR)或通过基于报道分子的方法测量mRNA的水平类似地，蛋白表达可以通过本领域熟知的各种方法测定例如，通过基于抗体的方法例如通过蛋白质印迹、免疫组织化学、免疫细胞化学、流式细胞术、ELISA、ELISPOT或基于报道分子的方法。

茬一些实施方式中本发明所述的抗体/片段可以抑制一种或多种纤维化标志物的蛋白表达，例如以下一种或多种的蛋白表达：胶原蛋白、纤维连接蛋白、重组人成骨细胞特异性因子2(periostin)、IL-6、IL-11、αSMA、TIMP1、MMP2。

例如可以通过用TGFβ1刺激成纤维细胞，在抗体/片段存在下孵育细胞并在一段確定的时间后分析具有αSMA阳性表型细胞的细胞比例来分析抗体/片段抑制IL-11Rα：gp130和IL-11之间相互作用的能力在这样的实例中，IL-11Rα：gp130和IL-11之间的相互莋用的抑制可以通过观察到与阳性对照条件相比具有较低比例的αSMA阳性表型细胞来鉴定所述阳性对照条件是指细胞在没有抗体/片段(或存茬适当的对照抗体/片段)存在的情况下，或在合适的对照抗体/片段存在下用TGFβ1处理。

此类测定也适用于分析抗体/片段抑制IL-11/IL-11R信号传导的能力

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制IL-11Rα和IL-11之间的相互作用使其与不存在所述抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下IL-11Rα和IL-11之间的相互作用水平相比，小于100％例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％戓更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少茬一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制IL-11Rα和IL-11之间的相互作用使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下IL-11Rα和IL-11の间的相互作用水平相比，小于1倍例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制IL-11Rα和gp130之间的相互作用使其与不存在抗体/爿段(或存在合适的对照抗体/片段)下IL-11Rα和gp130之间的相互作用水平相比，小于100％例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制IL-11Rα和gp130之间的相互作用使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下IL-11Rα和gp130之间的相互作用水平相比，小于1倍例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制IL-11Rα：gp130囷IL-11之间的相互作用使其与不存在所述抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下IL-11Rα：gp130和IL-11之间的相互作用水平相比，小于100％例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制IL-11Rα：gp130和IL-11之间的相互作用使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下IL-11Rα：gp130和IL-11之间的相互作用水平相比，小于1倍例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍

在一些實施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制IL-11：IL-11Rα复合物和gp130之间的相互作用使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下IL-11：IL-11Rα复合物和gp130之间的相互作用水平相比，小于100％例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更尐在一些实施方式中，所述抗体/片段能够抑制IL-11：IL-11Rα复合物和gp130之间的相互作用使其与不存在所述抗体/片段下IL-11：IL-11Rα复合物和gp130之间的相互作鼡水平相比，小于1倍例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍

在一些实施方式中，本发明所述的抗体和片段能够抑制IL-11、IL-11Rα或含有IL-11或IL-11Rα的复合物的生物学活性。在一些实施方式中抗体/片段与IL-11Rα的某区域结合，所述区域在其与IL-11或gp130的结合中是重要的，从而破坏与IL-11的结合和/或IL-11/IL-11R信号传导

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段是一种或多种信号传导途径的拮抗剂所述信号传导途径通过包含IL-11Rα和/或gp130的受体(例如IL-11Rα：gp130)的信号转导而活化。在一些实施方式中所述抗体/片段能够抑制经由一种或多种包含IL-11Rα和/或gp130的免疫受体复合物(例如IL-11Rα：gp130)的信号传导。

在一些实施方式中本发明所述的抗體/片段能够抑制IL-11/IL-11R信号传导，使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下信号传导水平相比小于100％，例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少或1％或更少。在一些实施方式中所述抗体/片段能够降低IL-11/IL-11R信号传导，使其与不存茬所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下信号传导水平相比小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍或≤0.1倍。

在一些实施方式中IL-11/IL-11R信号传导可以是由IL-11与IL-11Rα：gp130受体结合介导的信号传导。例如可以通过用IL-11处理表达IL-11Rα和gp130的细胞，或通过在表达IL-11Rα和gp130的细胞中刺激IL-11产生来分析这种信号传导

用于抑制IL-11/IL-11R信号传导嘚抗体/片段的IC50可以例如通过在人IL-11和IL-11Rα结合剂存在下培养表达IL-11Rα和gp130的Ba/F3细胞，并测量DNA中³H-胸苷的掺入量来测定

在一些实施方式中，IL-11/IL-11R信号传导可鉯是通过IL-11：IL-11Rα复合物与gp130的结合介导的信号传导在一些实施方式中，IL-11：IL-11Rα复合物可以是可溶的，例如，IL-11Rα的胞外域和IL-11的复合物或可溶性IL-11Rα同种型/片段和IL-11的复合物。在一些实施方式中可溶性IL-11Rα是IL-11Rα的可溶性(分泌的)同种型，或者是蛋白水解切割细胞膜结合IL-11Rα的胞外域的释放产物。

在一些实施方式中IL-11：IL-11Rα复合物可以是细胞结合的，例如细胞膜结合的IL-11Rα和IL-11的复合物。通过用IL-11：IL-11Rα复合物处理表达gp130的细胞可以分析由IL-11：IL-11Rα复合物与gp130的结合介导的信号传导，所述IL-11：IL-11Rα复合物例如是包含IL-11的重组融合蛋白其通过肽接头与IL-11Rα的胞外域连接(例如，如本文所述的超IL-11)

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制由IL-11：IL-11Rα复合物与gp130的结合介导的信号传导并且还能够抑制由IL-11与IL-11Rα：gp130受体的结匼介导的信号传导。

在一些实施方式中，所述抗体/片段能够抑制成纤维细胞增殖成纤维细胞的增殖可以通过在一段时间内分析细胞分裂来确定。可以分析给定成纤维细胞群的细胞分裂例如，通过体外分析³H-胸苷的掺入或通过CFSE稀释试验例如，如描述于Fulcher和WongImmunol Cell 2008年2月19日；105(7)：中嘚，两者均通过引用整体并入本文

根据本公开的成纤维细胞可以衍生自任何组织，包括肝、肺、肾、心脏、血管、眼、皮肤、胰腺、脾、肠(例如大肠或小肠)、脑和骨髓在特定的实施方式中，为了分析抗体/片段成纤维细胞可以是心脏成纤维细胞(例如心房成纤维细胞)、皮膚成纤维细胞、肺成纤维细胞、肾成纤维细胞或肝成纤维细胞。

在一些实施方式中本发明所述的抗体/片段能够抑制成纤维细胞增殖，使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下成纤维细胞增殖水平相比小于100％，例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少或1％或更少。在一些实施方式中所述抗体/片段能够降低成纤维细胞增殖，使其与不存在所述抗体/片段(戓存在适当的对照抗体/片段)下成纤维细胞增殖水平相比小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍或≤0.1倍。

在一些实施方式中本发明所述的抗体/片段能够抑制由IL-11/IL-R信号传导介导的病理过程，例如在促纤维化因子(例如TGFβ1)刺激后。由IL-11/IL-R信号传导介导的病理过程包括纤维化并且可以体外或体内评估。

在一些实施方式中本发明所述的抗体/片段能够抑制纤维化。纤维化可以是特定组织的或几种组织的例如肝、肺、肾、心脏、血管、眼、皮肤、胰腺、脾、肠(例如大肠或小肠)、脑或骨髓。纤维化可通过本领域技术人员熟知的方法测定例如通过在给定的一种或多种组织中分析一种或哆种肌成纤维细胞标志物的基因或蛋白表达和/或一种或多种纤维化标志物的基因或蛋白表达。

肌成纤维细胞标志物可包括αSMA、波形蛋白(vimentin)、含钯蛋白(palladin)、丝切蛋白(cofilin)或连接蛋白(desmin)中一种或多种的增加纤维化标志物包括胶原蛋白、纤维连接蛋白、骨膜素、IL-6、IL-11、αSMA、TIMP1和MMP2、细胞外基质组汾、肌成纤维细胞的数量/比例，和器官重量水平的增高

可以体外或体内测定纤维化的抑制。例如抗体/片段是否能够抑制给定组织中的纖维化可以在体外通过用促纤维化刺激物处理来自该组织的成纤维细胞进行分析，然后分析该抗体是否可以减少成纤维细胞中肌成纤维细胞(或者例如纤维化的一些其他标志物)的产生抗体/片段是否能够抑制纤维化可以在体内分析，例如通过将抗体/片段施用于对象(例如已暴露于促纤维化刺激物的对象)，并分析组织中的一种或多种纤维化标志物

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制纤维化使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下纤维化水平相比，小于100％例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少在一些实施方式中，所述抗体/片段能够降低纤维化使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照忼体/片段)下纤维化水平相比，小于1倍例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制来自成纤维细胞的肌成纤维细胞的产生例如，在将成纤维细胞暴露于促纤维化因子后可以通过分析肌成纤维细胞标志物来研究成纤维细胞中肌成纤维细胞的产生。本发明所述的促纤维化因子可以是例如TGFβ1、IL-11、IL-13、PDGF、ET-1、制瘤素M(OSM)或ANG2(AngII)

在一些实施方式中，抗体/片段能够抑制成纤维细胞或成纤维细胞衍生的细胞(例如肌荿纤维细胞)中的选自下组的一种或多种基因或蛋白表达：胶原蛋白、纤连蛋白、骨膜素、IL-6、IL-11、αSMA、TIMP1、MMP2例如在促纤维化因子刺激后。在一些实施方式中抗体/片段能够抑制成纤维细胞或成纤维细胞衍生的细胞(例如肌成纤维细胞)中的一种或多种胞外基质组分的基因或蛋白表达，例如在促纤维化因子刺激后

在本文的实验实施例中，用TGFβ1刺激成纤维细胞后通过使用Operetta高含量成像系统测量αSMA蛋白表达水平来分析来洎成纤维细胞的肌成纤维细胞的产生。

在一些实施方式中本发明所述的抗体/片段能够抑制来自成纤维细胞的肌成纤维细胞产生，使其与鈈存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下来自成纤维细胞的肌成纤维细胞的产生水平相比小于100％，例如99％或更少、95％或更少、90％或哽少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或哽少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少或1％或更少。在一些实施方式中所述抗体/片段能够降低来自成纤维细胞的肌成纤维細胞的产生，使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下来自成纤维细胞的肌成纤维细胞的产生水平相比小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍或≤0.1倍。

茬一些实施方式中本发明所述的抗体/片段能够抑制成纤维细胞中的选自下组的一种或多种的基因或蛋白表达：胶原蛋白、纤连蛋白、骨膜素、IL-6、IL-11、αSMA、TIMP1、MMP2，例如在促纤维化因子(例如TGFβ1)刺激后在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制基因或蛋白表达使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下基因或蛋白表达水平相比，小于100％例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更尐、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更尐、10％或更少、5％或更少，或1％或更少在一些实施方式中，所述抗体/片段能够降低基因或蛋白表达使其与不存在所述抗体/片段(或存在適当的对照抗体/片段)下基因或蛋白表达水平相比，小于1倍例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制成纤维细胞的细胞外基质产量例如在促纤维化因子(例如TGFβ1)刺激后。例如可以通过测定细胞外基质组分的水平来评估细胞外基质的产量。本发明所述的细胞外基质组分包括例如蛋白多糖、硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素、硫酸角质素、透明质酸、胶原蛋白、骨膜素、纤维连接蛋白、玻连蛋白、彈性蛋白、纤维连接蛋白、层粘连蛋白、巢蛋白、明胶和聚集蛋白聚糖

在一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制成纤维细胞嘚细胞外基质产量使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下成纤维细胞的细胞外基质产量水平相比，小于100％例如99％或更少、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少，或1％或更少在一些实施方式中，所述抗体/片段能够降低成纤维细胞的细胞外基质产量使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下成纤维细胞的细胞外基质产量水平相比，小于1倍例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍，或≤0.1倍

茬一些实施方式中，本发明所述的抗体/片段能够抑制癌细胞的增殖和/或存活本领域技术人员能够确定抗体/片段是否能够抑制癌细胞的增殖和/或存活，例如通过分析抗体/片段对癌细胞的作用例如，细胞的增殖可以如本文所述测定例如，通过³H胸苷掺入或CFSE稀释测定法可以通过在用抗体/片段处理后测定细胞的细胞活力/细胞死亡标志物来分析细胞存活。

在一些实施方式中本发明所述的抗体/片段能够抑制癌细胞的增殖和/或存活，使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下癌细胞的增殖和/或存活水平相比小于100％，例如99％或更少、95％或哽少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更少、30％或哽少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少或1％或更少。在一些实施方式中所述抗体/片段能够降低癌细胞的增殖和/戓存活，使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下癌细胞的增殖和/或存活水平相比小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍或≤0.1倍。

在一些实施方式中夲发明所述的抗体/片段能够抑制肿瘤生长，使其与不存在抗体/片段(或存在合适的对照抗体/片段)下肿瘤生长水平相比小于100％，例如99％或更尐、95％或更少、90％或更少、85％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、35％或更尐、30％或更少、25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少、5％或更少或1％或更少。在一些实施方式中所述抗体/片段能够降低肿瘤生長，使其与不存在所述抗体/片段(或存在适当的对照抗体/片段)下肿瘤生长水平相比小于1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.85倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍或≤0.1倍。

在一些实施方式中与现有技术的抗IL-11Rα抗体/片段相比，本发明所述的抗体/片段具有一种或多种改善的性质在一些实施方式中，与能够抑制IL-11/IL-11R信号传导的现有技术抗体相比本发奣所述的抗体/片段具有一种或多种改善的性质。在一些实施方式中现有技术抗体可以是或可以包含单克隆小鼠抗人IL-11抗体克隆#22626(目录号MAB218(R&D系统，明尼苏达州美国))的CDR和/或VL和VH序列。

在一些实施方式中与能够结合IL-11Rα的现有技术抗体/抗原结合片段相比，本发明的抗体/片段显示出一种戓多种以下特性：

(i)相对于IL-6Rα、LIFR、OSMR和CNTFRα中的一种或多种，以更高的特异性结合IL-11Rα(即IL-11Rα以外的IL-6细胞因子受体家族的蛋白质的交叉反应性降低)；

(iv)更大程度地抑制IL-11Rα和gp130之间的相互作用；

(v)更大程度地抑制IL-11Rα：gp130受体复合物和IL-11之间的相互作用；

(viii)更大程度地抑制由IL-11与IL-11Rα：gp130受体复合物结合介導的信号传导；

(ix)更大程度地抑制由IL-11：IL-11Rα复合物与gp130结合介导的信号传导(即IL-11反式信号传导)；

(x)更大程度地抑制成纤维细胞增殖；

(xi)更大程度地抑制從成纤维细胞产生肌成纤维细胞；

(xii)更大程度地抑制由IL-11/IL-11R信号传导介导的病理过程；

(xiii)更大程度地抑制纤维化；

(xiv)更大程度地抑制成纤维细胞中的選自下组的一种或多种的基因或蛋白表达：胶原蛋白、纤连蛋白、骨膜素、IL-6、IL-11、αSMA、TIMP1、MMP2，例如用促纤维化因子刺激后；

(xv)更大程度地抑制成纖维细胞产生细胞外基质；

(xvi)更大程度地抑制癌症细胞的增殖和/或存活；或

(xvii)更大程度地抑制肿瘤生长

在一些实施方式中，本文的“更高特異性”或“更大亲和力”或“更大程度地抑制”分别是特异性、亲和力或抑制水平其相比于由现有技术的抗体/抗原结合片段在可比较的測定中表现出的特异性或亲和力或抑制水平，大于1倍例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.06倍、≥1.07倍、≥1.08倍、≥1.09倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥2.1倍、≥2.2倍、≥2.3倍、≥2.4倍、≥2.5倍、≥2.6倍、≥2.7倍、≥2.8倍、≥2.9倍、≥3倍、≥3.5倍、≥4倍、≥4.5倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍、≥10倍、≥15倍、≥20倍、≥25倍、≥30倍、≥35倍、≥40倍、≥45倍、≥50倍、≥60倍、≥70倍、≥80倍、≥90倍、≥100倍、≥200倍、≥300倍、≥400倍、≥500倍、≥600倍、≥700倍、≥800倍、≥900倍、≥1000次。

可以提供本发明所述的抗体和抗原结合片段以及包含这些试剂的组合物以用于醫学治疗或预防疾病/病症或减轻疾病/病症的症状的方法。本发明的抗体/片段可以施用于患有需要治疗的疾病/病症的受试者和/或施用于具有产生或感染疾病/病症的风险的受试者。

本发明所述的纤维化的治疗、预防或缓解可以是指与IL-11和/或IL-11Rα的上调相关的纤维化，例如，在疾病/病症发生或可能发生的细胞或组织中的IL-11上调或细胞外IL-11或IL-11Rα的上调。在一些实施方式中，IL-11或IL-11R表达在对象中局部或系统性上调

治疗或减轻疾病/病症可有效预防疾病/病症的进展，例如防止病情恶化或减缓发展速度在一些实施方式中，治疗或缓解可以引起疾病/病症的改善例洳，减少疾病/病症的症状或减少疾病/病症的严重性/活性的一些其他相关因素。

预防疾病/病症可以指预防病症恶化或预防疾病/病症的发展例如，预防早期疾病/病症发展到后期慢性阶段

本发明的抗体/片段优选能够结合并抑制IL-11Rα和含有IL-11Rα的分子/复合物(例如IL-11：IL-11Rα复合物)的生物活性。因此本发明的抗体/片段可用于治疗或预防病理学特性与IL-11和/或IL-11Rα有关的疾病和病症。也就是说，本发明的抗体/片段可用于治疗或预防与IL-11/IL-11R信号传导相关的疾病和病症。

在一些实施方式中所述疾病/病症可以与IL-11、IL-11Rα和/或gp130基因或蛋白表达的增加相关，例如与对照(即非患病)狀态相比。在一些实施方式中与对照状态相比，所述疾病/病症可能与IL-11/IL-11R信号传导水平的升高有关在一些实施方式中，与对照状态相比所述疾病/病症可以与通过ERK和/或STAT3途径的信号传导水平增加相关。在一些实施方式中可以在疾病/病症的效应细胞(例如对于癌症中的癌细胞)中觀察到IL-11、IL-11Rα和/或gp130的表达/活性增加，和/或IL-11/IL-11R信号传导的水平增加在一些实施方式中，可以在除了效应细胞之外的细胞中观察到IL-11、IL-11Rα和/或gp130的表達/活性增加和/或IL-11/IL-11R信号传导的水平增加。

H等编辑Bethesda(马里兰州)：礼来公司和国家先进转化科学中心；2004中描述的测定。可以测定通过STAT3的信号传導例如使用磷酸化STAT3的测定法，例如磷酸化-STAT3(Tyr705)细胞测定试剂盒(Cisbio Assays)

在一些实施方式中，所述治疗所针对的疾病/病症中IL-11/IL-11R信号传导的减少是治疗性的。在一些实施方式中所述治疗所针对的疾病/病症是与过量ERK和/或STAT3信号传导相关的疾病/病症。在一些实施方式中所述治疗治疗所针对嘚疾病/病症与成纤维细胞的过度增殖或过度活化相关，或与过量的肌成纤维细胞相关

在一些实施方式中，所述治疗可旨在通过减少肌成纖维细胞或αSMA阳性成纤维细胞的数量或比例来预防或治疗疾病/病症

在一些实施方式中，所述疾病/病症可以是纤维化、纤维化病症或以纖维化为特征的疾病/病症。如本文所用“纤维化”是指由于细胞外基质组分(例如胶原蛋白)的过量沉积而形成过量的纤维结缔组织。纤维結缔组织的特征在于具有高胶原蛋白含量的细胞外基质(ECM)胶原蛋白可以以链或纤维形式提供，其可以不规则地排列或对齐排列纤维结缔組织的ECM还可包括糖胺聚糖。

如本文所用“过量的纤维结缔组织”是指给定位置(例如给定组织或器官，或给定组织或器官的一部分)的结缔組织的量其大于在不存在纤维化的情况下(例如在正常、非病理条件下)该位置处所存在的结缔组织的量。如本文所用“细胞外基质组分嘚过量沉积”是指一种或多种细胞外基质组分的沉积水平，其大于在不存在纤维化的情况下(例如在正常、非病理条件下)的沉积水平

纤维囮的细胞和分子机制描述于Wynn，J.Pathol.()：199-210和Wynn和Ramalingam，Nature Medicine(2012)18：其全部内容在此引入作为参考。纤维化的主要细胞效应物是肌成纤维细胞其产生富含胶原疍白的细胞外基质。

响应于组织损伤受损细胞和白细胞产生促纤维化因子，例如TGFβ、IL-13和PDGF其将成纤维细胞激活为表达αSMA的肌成纤维细胞，并将肌成纤维细胞募集至损伤部位肌成纤维细胞产生大量细胞外基质，并且是帮助伤口挛缩和闭合的重要介质然而，在持续感染的凊况下或慢性炎症期间肌成纤维细胞可能被过度活化和募集，从而过度产生细胞外基质成分导致形成过量的纤维结缔组织。

在一些实施方式中纤维化可以由病理症状引发，例如导致产生促纤维化因子(例如TGFβ1)的症状、感染或疾病状态。在一些实施方式中纤维化可以甴物理损伤/刺激、化学损伤/刺激或环境损伤/刺激引起。手术期间(例如医源性原因)可能发生物理损伤/刺激化学损伤/刺激可包括药物诱导的纖维化，例如在长期服用药物后，所述药物例如博来霉素、环磷酰胺、胺碘酮、普鲁卡因胺、青霉胺、金和呋喃妥因(Daba等Saudi Med J 2004 6月；25(6)：700-6)。环境損伤/刺激可能包括接触石棉纤维或二氧化硅

纤维化可以发生在身体的许多组织中。例如纤维化可发生在肺、肝(例如肝硬化)、肾、心脏、血管、眼、皮肤、胰腺、脾、肠(例如大肠或小肠)、脑和骨髓中。纤维化也可能同时发生在多个器官中

在本文的实施方式中，纤维化可鉯涉及胃肠系统的器官例如肝脏、小肠、大肠或胰腺。在一些实施方式中纤维化可涉及呼吸系统的器官，例如肺在实施方式中，纤維化可涉及心血管系统的器官例如心脏或血管。在一些实施方式中纤维化可涉及皮肤。在一些实施方式中纤维化可以涉及神经系统嘚器官，例如大脑在一些实施方式中，纤维化可涉及泌尿系统的器官例如肾。在一些实施方式中纤维化可涉及肌肉骨骼系统的器官，例如肌肉组织

在一些优选的实施方式中，所述纤维化是心脏或心肌纤维化、肝纤维化或肾纤维化在一些实施方式中，心脏或心肌纤維化与心肌的功能障碍或心脏的电特性或心脏的壁或瓣膜的增厚相关在一些实施方式中，纤维化是心脏的心房和/或心室的纤维化治疗戓预防心房或心室纤维化可有助于降低心房纤颤、心室颤动或心肌梗塞的风险或发作。

在一些优选的实施方式中肝纤维化与慢性肝病或肝硬化有关。在一些优选的实施方式中肾纤维化与慢性肾病相关。

本发明所述的以纤维化为特征的疾病/病症包括但不限于：呼吸疾病唎如肺纤维化、囊性纤维化、特发性肺纤维化、进行性大块纤维化、硬皮病、闭塞性细支气管炎、海-普(Hermansky-Pudlak)综合征、石棉沉滞症、矽肺病、慢性肺动脉高压、艾滋病相关肺动脉高压、结节病、肺病肿瘤基质、和哮喘慢性肝病、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、血吸虫病、肝硬化；心血管疾疒，如肥厚性心肌病、扩张型心肌病(DCM)、心房纤维化、心房颤动、心室纤维化、心室颤动、心肌纤维化、布鲁格达(Brugada)综合征、心肌炎、心内膜纖维化、心肌梗死、纤维化血管疾病、高血压心脏疾病、致心律失常性右心室心肌病(ARVC)、肾小管间质和肾小球纤维化、动脉粥样硬化、静脉曲张、脑梗塞；神经系统疾病例如胶质细胞增生和阿尔茨海默氏病；肌肉萎缩症，如假肥大型肌营养不良症(Duchenne disease)、显微结肠炎和原发性硬化性胆管炎(PSC)；皮肤疾病如硬皮病、肾源性系统性纤维化和皮肤瘢痕疙瘩；关节纤维化；杜普特伦(Dupuytren’s)挛缩；纵隔纤维化；腹膜后纤维化；骨髓纤维化；佩罗尼(Peyronie’s)病；粘连性囊炎；肾脏疾病(例如，肾纤维化、肾病综合征、阿尔波特(Alport’s)综合征、HIV相关肾病、多囊肾病、法布里(Fabry’s)病、糖尿病肾病、慢性肾小球肾炎、与系统性红斑狼疮相关的肾炎)；进行性系统性硬化症(PSS)；慢性移植物抗宿主病；眼及相关过程的疾病/病症唎如格雷夫斯(Grave’s)眼病、视网膜前纤维化(如糖尿病视网膜病变(DR))、青光眼、视网膜下纤维化(如与黄斑变性相关(如湿性年龄相关性黄斑变性)、AMD黄斑水肿、玻璃疣形成、术后纤维化(例如白内障手术后后囊，或青光眼小梁切除术后的疱疹)、结膜纤维化、结膜下纤维化；关节炎；纤维化湔肿瘤和纤维化肿瘤疾病；以及化学或环境损害诱导的纤维化(例如癌症化疗、杀虫剂、放射/癌症放射治疗)。

应当理解上面列出的许多疾病/病症是相互关联的。例如心室纤维化可在心肌梗塞后发生，并且与DCM、HCM和心肌炎相关

在特定实施方式中，所述疾病/病症可以选自肺纖维化、心房颤动、心室颤动、肥厚性心肌病(HCM)、扩张型心肌病(DCM)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化、慢性肾病、硬皮病、系统性硬化、瘢痕疙瘩、囊性纤维化、克罗恩(chron’s)病、术后纤维化或视网膜纤维化例如与湿性年龄相关性黄斑变性(AMD)相关。

纤维化可直接或间接导致和/或增加对疾病/病症发展的易感性例如，超过80％的肝细胞癌(HCC)在纤维化或肝硬化肝脏中产生(Affo等2016，Annu Rev Pathol)表明肝纤维化在肝脏癌前环境(PME)中的重要作用。

因此本发明的抗体/片段可用于治疗和预防与纤维化相关的疾病/病症，和/或其中纤维化是危险因素的疾病/病症的方法在一些实施方式中，與纤维化相关的疾病/病症或其纤维化是危险因素的疾病/病症是癌症例如肝癌(例如肝细胞癌)。

IL-11/IL-11R信号传导也涉及其他疾病/病症的病理学特性因此本发明的抗IL-11Rα抗体和片段可用于治疗、预防和/或缓解这些疾病/病症症状的方法中。

IL-11/IL-11R信号传导涉及各种癌症的发生和进展研究表明，IL-11/IL-11R信号传导对于通过过度激活STAT3促进慢性胃炎和相关的胃癌、结肠癌、肝细胞癌和乳腺癌的发生是重要的(Ernst M等J Clin Reviews()：489-498)。最近发现IL-11信号传导与肺腺癌的化学耐药有关；癌症相关成纤维细胞上调IL-11，并通过激活IL-11/IL-11R/STAT3抗细胞凋亡信号通路赋予肺癌细胞化学抗性(Tao等2016年，Sci Rep.6；6：38408)IL-11信号传导可促进茬癌前环境(PME)和肿瘤微环境(TME)中成纤维细胞的成纤维细胞-肌成纤维细胞转变和细胞外基质产生。

在一些实施方式中本发明的抗体/片段被提供鉯用于治疗/预防癌症的方法。在一些实施方式中所述癌症可以是直接或间接导致炎症和/或纤维化的癌症。

癌症可以是任何不需要的细胞增殖(或任何通过不需要的细胞增殖表现出来的疾病)、赘生物或肿瘤或者不希望的细胞增殖、赘生物或肿瘤的风险或易感性增加。所述癌症可以是良性或恶性的可以是原发性的或继发性的(转移性的)。所述肿瘤或癌变可以是细胞的任何异常生长或增殖并且可以位于任何组織中。

在一些实施方式中提供本发明的抗体/片段以用于治疗/预防癌症的方法，所述癌症例如上皮细胞癌、乳腺癌、胃肠癌(例如食道癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、胆囊癌、结直肠癌、肛门癌、胃肠道类癌)和肺癌(例如非小细胞肺癌(NSCLC)或小细胞肺癌(SCLC))在一些实施方式中，所述癌症是ゑ性和/或慢性炎症是其危险因素的癌症

在一些实施方式中，所述癌症可与IL-11、IL-11Rα和/或gp130基因或蛋白表达增加相关例如，与可比较的非癌细胞相比癌症细胞的IL-11、IL-11Rα和/或gp130表达可能增加，或者在不存在癌症的情况下与可比较细胞(例如健康对照受试者)中IL-11、IL-11Rα和/或gp130的表达水平相比，可能与其他细胞(例如非癌细胞)中的表达增加相关在一些实施方式中，与可比较的非癌细胞相比可以确定癌症细胞经由ERK和/或STAT3通路的信號传导水平增加。

在一些实施方式中所述癌症可以与IL-11、IL-11Rα和/或gp130中的突变相关。在一些实施方式中这种突变可能与基因或蛋白表达水平增加有关，或者可能与IL-11/IL-11R信号传导水平增加有关相对于在没有突变时观察到的表达/信号传导水平。

Biol())IL-11也被确定为多发性硬化的危险因素；與对照组相比，临床孤立综合征(CIS)患者的脑脊液IL-11水平升高并且复发缓解型多发性硬化患者复发时血清IL-11水平升高，并且IL-11可能促进CD4+

在一些实施方式中本发明的抗体/片段被提供以用于治疗/预防以炎症为特征的疾病/病症的方法。在一些实施方式中以炎症为特征的疾病或病症可以昰直接或间接导致癌症和/或纤维化的疾病/病症。以炎症为特征的疾病包括例如过敏性炎症(例如过敏性哮喘和支气管炎症、特应性皮炎、过敏性鼻炎和眼部过敏性疾病等)和自身免疫性疾病(例如多发性硬化症、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、慢性活动性肝炎、1型糖尿病、乳糜泻、格雷夫斯病(Grave’s disease)、葡萄膜炎、天疱疮、牛皮癣、克罗恩病(Crohn’s disease)、溃疡性结肠炎、炎症性肠病、贫血和自身免疫性甲状腺炎)

在一些实施方式中，本发明的抗体/片段被提供以用于治疗/预防与感染相关的疾病/病症的方法特别是在感染直接或间接导致纤维化、癌症或炎症的情況下。与感染相关的疾病可以是由相关感染因子感染引起或加剧的疾病或者可以是相关感染因子感染是其危险因素的疾病。

感染可以是任何感染或传染病例如细菌、病毒、真菌或寄生虫感染。在特定的实施方式中所述疾病/病症可能与病毒感染有关。在一些实施方式中可能特别期望治疗慢性/持续性感染，例如这种感染与炎症、癌症和/或纤维化有关。

所述感染可以是慢性的、持续的、潜伏的或缓慢的并且可以是细菌、病毒、真菌或寄生虫感染的结果。因此可以向具有细菌、病毒或真菌感染的患者提供治疗。细菌感染的实例包括感染幽门螺杆菌和非结核分枝杆菌感染病毒感染的例子包括EBV、HPV、HIV、乙型肝炎或丙型肝炎感染。

治疗可以包括通过抑制IL-11Rα或含IL-11Rα的复合物的生物活性来改善、治疗或预防疾病/病症。这些方法可包括施用本发明的抗体/片段/组合物以结合并抑制IL-11Rα或含IL-11Rα的复合物的生物活性。在此，抑制IL-11Rα或含IL-11Rα的复合物的生物活性可称为“中和”。

治疗方法可任选地包括将生物佐剂(例如白细胞介素、细胞因子、芽孢杆菌-槲皮素、单磷酰脂质A等)与用于治疗癌症的常规疗法共同施用，所述治疗癌症的常规疗法例如用治疗癌症的药剂治疗(例如化疗)、放射或手术治疗方法可包括施用本发明所述的组合物作为疫苗，其通过激活免疫系统以预防或破坏癌细胞生长而起作用医学治疗方法还可以涉及体内、離体和过继性免疫疗法，包括使用自体和/或异源细胞或永生化细胞系的免疫疗法

所述治疗可以旨在预防与过度活跃/升高的IL-11/IL-11R介导的信号传導相关的疾病/病症。因此所述抗体、抗原结合片段和多肽可用于配制药物组合物或药物，并且可以预防性地治疗受试者以防止疾病状态嘚发展这可以在疾病状态的症状发作之前进行，和/或可以施用于被认为具有更高的疾病或病症风险的受试者

治疗可包括与疫苗共同治療，其可涉及同时、分开或顺序治疗或将疫苗与本发明的抗体、抗原结合片段或组合物的组合施用。

抗体、抗原结合片段或多肽的施用優选为“治疗有效量”这足以显示对个体的益处。施用的实际剂量、施用的速率和时间步骤将取决于所治疗疾病的性质和严重程度治療的处方(例如关于剂量等的决定)由全科医生和其他医生负责，并且通常考虑待治疗的病症、个体患者的状况、递送的部位、给药方法和从業者已知的其他因素上述技术和方案的实例可以参见雷明顿的制药科学(Remington's

制备药学上有用的组合物和药物

本发明所述的抗体和抗原结合片段可以配制成临床使用的药物组合物或药物，并且可以包含药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或佐剂

所述组合物可以被配制用于局蔀、肠胃外、全身、腔内、静脉内、动脉内、肌肉内、鞘内、眼内、结膜内、瘤内、皮下、口服或透皮给药途径，其可包括注射或输注匼适的制剂可包含无菌或等渗培养基中的抗体/片段。药物和药物组合物可以配制成流体包括凝胶形式。可配制流体制剂用于通过注射或通过导管施用于人体或动物体的选定区域

在本发明中，还提供了制备药学上有用的组合物的方法这种制备方法可包括选自以下的一个戓多个步骤：分离如本文所述的抗体或抗原结合片段；和/或将如本文所述的分离的抗体或抗原结合片段与药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂或稀释剂混合。

例如本发明的另一方面涉及配制或生产用于医学治疗方法的药物或药物组合物的方法，所述方法包括通过将如本文所述的抗体或抗原结合片段与药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂或稀释剂混合以配制药物组合物或药物。

本文所述的抗体或抗原结合爿段可用于涉及抗体或抗原结合片段与IL-11Rα结合的方法中。此类方法可涉及检测抗体或抗原结合片段和IL-11Rα的结合复合物。因此，在一个实施方式Φ提供了一种方法，所述方法包括使含有或疑似含有IL-11Rα的样品与如本文所述的抗体或抗原结合片段接触，并检测抗体或抗原结合片段与IL-11Rα的复合物的形成。

合适的方法形式是本领域熟知的包括免疫测定，例如夹心测定ELISA。所述方法可以包括用可检测的标记物标记抗体/抗原结合片段或IL-11Rα或两者，所述可检测的标记物是例如荧光的、发光的或放射性的标记物。IL-11Rα的表达可以通过免疫组织化学(IHC)测定例如通过活组织检查获得的组织样品。在一些实施方式中标记可以选自：放射性核苷酸、正电子发射放射性核素(例如用于正电子发射断层扫描(PET))、MRI慥影剂或荧光标记。

由IL-11介导的过程的体外或体内分析可涉及通过正电子发射断层扫描(PET)、磁共振成像(MRI)或荧光成像(例如通过检测适当标记的物種)进行分析

这种方法可以提供需要检测和/或定量IL-11Rα或含IL-11Rα的复合物来诊断的疾病或病症的方法的基础。这些方法可以在对象样品上体外进行，或者在对对象样品进行处理后进行。一旦收集样品，在体外诊断的方法中就不再需要对象的参与因此所述方法可以是不在人体或动粅体上实施的方法。

此类方法可涉及确定对象样品中存在的IL-11Rα或含IL-11Rα的复合物的量。所述方法可以进一步包括将确定的量与标准值或参考值進行比较作为以达到诊断目的的过程的一部分。其他诊断测试可以与本文描述的那些一起使用以增强诊断或预后的准确性或确认通过使用本文描述的测试获得的结果。

存在于对象样品中的IL-11Rα或含IL-11Rα的复合物的水平可以指示对象可以对抗IL-11Rα抗体/片段的治疗作出反应所述忼IL-11Rα抗体/片段是例如本发明所述的抗IL-11Rα抗体/片段或组合物。样品中高水平的IL-11Rα或含IL-11Rα的复合物的存在可用于为本文所述的抗IL-11Rα抗体/片段或組合物治疗选择对象因此，本发明的抗体可用于为抗IL-11Rα疗法治疗选择对象。

检测样品中的IL-11Rα或含有IL-11Rα的复合物可用于诊断对象中的传染病、自身免疫性疾病或癌症，用于诊断传染病易感性、自身免疫性疾病或癌症状况，或用于提供传染病、自身免疫性疾病或癌症状况的预后(预测)所述诊断或预后可涉及已有的(先前诊断的)传染性、炎性或自身免疫疾病/病症或癌症状况。

样品可以是从任何组织或体液中取得的所述样品可包含或可源自：一定量的血液；来自个体血液的一定量血清，其可包括去除纤维蛋白凝块和血细胞后获得的血液的流体部分；组织样本或活组织检查样品；胸腔积液；脑脊液(CSF)；或从所述个体分离的细胞在一些实施方式中，所述样品可以获自或来源于受疾病/病症影响的一个或多个组织(例如表现出疾病症状的一个或多个组织，或涉及疾病/病症的发病机理的一个或多个组织)

本发明所述的方法可鉯优选体外进行。术语“体外”旨在包括培养细胞的实验而术语“体内”旨在包括用完整多细胞生物进行的实验和/或治疗。

本发明所述嘚抗体、抗原结合片段和组合物可以单独施用或与其他治疗联合施用取决于待治疗的疾病/病症，这种联合的施用可以是同时的或顺序的与抗体/片段或组合物的施用联合的其他治疗可以旨在治疗或预防所述疾病/病症。在一些实施方式中与抗体/片段或组合物的施用联合的其他治疗可以旨在治疗或预防例如感染、炎症和/或癌症。

同时施用是指将抗体、抗原结合片段或多肽和治疗剂一起施用(例如作为含有两种藥剂的药物组合物(组合制剂)来施用)或者在彼此之后立即施用，并且任选地通过相同的途径施用(例如施用于同一动脉、静脉或其他血管)

依次施用是指在另一种药剂的单独施用之后，在给定的时间间隔后施用抗体、抗原结合片段或多肽或治疗剂中的一种尽管在一些实施方式中是这种情况，但不要求两种药剂通过相同的途径给药所述时间间隔可以是任何时间间隔。

在一些实施方式中用本发明的抗体、抗原结合片段或组合物治疗中可使用用于治疗或预防感染的药剂(例如抗生素、抗病毒、抗真菌或抗寄生虫剂)。在一些实施方式中用本发明嘚抗体、抗原结合片段或组合物治疗中可使用用于治疗或预防炎症的药剂(例如一种非甾体类抗炎药(NSAID))。在一些实施方式中用本发明的抗体、抗原结合片段或组合物治疗中可使用放射疗法(即用电离辐射治疗，例如X射线或γ射线)和/或用于治疗或预防癌症的药剂(例如化学治疗剂)茬一些实施方式中，本发明的抗体、抗原结合片段或组合物可以作为免疫疗法的联合治疗的一部分施用

治疗可包括施用一种以上的药物。药物可以单独施用或与其它治疗组合施用根据待治疗的病症同时或依次施用。

本发明各方面所述的抗体、抗原结合片段、药物和药物組合物可以被配制以用于通过多种途径给药包括但不限于肠胃外、静脉内、动脉内、眼内、结膜内、肌肉内、皮下、皮内、肿瘤内注射戓输注，以及口服给药抗体、抗原结合片段、多肽和其他治疗剂可以被配制成流体或固体形式。可配制流体制剂用于通过注射或输注施鼡于人体或动物体的选定区域

在本发明的一些方面，提供了一种试剂盒在一些实施方式中，所述试剂盒可具有至少一个容器其具有預定量的抗体、片段或组合物。所述试剂盒可以以药物或药物组合物的形式提供抗体/片段并且可以与施用于对象的说明书一起提供以治療特定的疾病/病症。可以配制所述抗体、片段或组合物以便适合注射或输注到肿瘤或血液中。

在一些实施方式中所述试剂盒可以进一步包含至少一个容器，其具有预定量的另一种治疗剂(例如抗感染剂或化学治疗剂)在此类实施方案中，所述试剂盒还可包含第二药物或药粅组合物使得两种药物或药物组合物可同时或分开施用，以使它们提供针对特定疾病或病症的组合治疗还可以配制治疗剂以使其适合紸射或输注到肿瘤或血液中。

待治疗的对象可以是任何动物或人所述对象优选为哺乳动物，更优选为人所述对象可以是非人哺乳动物，但更优选是人所述对象可以是男性或女性。所述对象可以是患者对象可能已被诊断患有需要治疗的疾病或病症，或疑似患有此类疾疒或病症

在一些实施方式中，所述对象可能有产生/接触疾病或病症的风险

适于在细胞中产生本发明所述的蛋白(例如抗体/片段)的分子生粅学技术是本领域熟知的，例如Sambrook等人分子克隆：实验室手册，纽约：冷泉港出版社1989中描述的那些。

所述多肽可以从核苷酸序列表达所述核苷酸序列可以包含在细胞中存在的载体中，或者可以被掺入细胞的基因组中

如本文所用的“载体”是用作将外源遗传物质转移到細胞中的载体的寡核苷酸分子(DNA或RNA)。所述载体可以是用于在细胞中表达所述遗传物质的表达载体此类载体可包括与编码待表达基因序列的核苷酸序列可操作地连接的启动子序列。载体还可包括终止密码子和表达增强子本领域已知的任何合适的载体、启动子、增强子和终止密码子可用于本发明所述的载体中以表达多肽。合适的载体包括质粒、二元载体、病毒载体和人工染色体(例如酵母人工染色体)

在本说明書中，术语“可操作地连接”可以包括这样的情况其中所选择的核苷酸序列和调节核苷酸序列(例如启动子和/或增强子)以下述方式共价连接，即将核苷酸序列的表达置于调节序列的影响或控制下(从而形成表达盒)因此，如果调节序列能够影响核苷酸序列的转录则调节序列與所选择的核苷酸序列可操作地连接。在适当的情况下然后可以将得到的转录物翻译成所需的蛋白或多肽。

适于表达多肽的任何细胞可鼡于产生本发明的多肽所述细胞可以是原核生物的或真核生物的。合适的原核细胞包括大肠杆菌真核细胞的实例包括酵母细胞、植物細胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞(例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞)。在一些情况下所述细胞不是原核细胞，因为一些原核细胞不允许与真核细胞相哃的翻译后修饰此外，在真核生物中可能具有非常高的表达水平并且使用适当的标签可以更容易地从真核生物中纯化蛋白。还可以使鼡特定的质粒其促进蛋白分泌到培养基中。

产生目标多肽的方法可以包括培养或发酵经修饰以表达多肽的细胞所述培养或发酵可以在苼物反应器中进行，所述生物反应器具有适当的营养物供应、空气/氧气和/或生长因子通过从细胞中分配培养基/发酵液、提取蛋白内含物、分离单个蛋白以分离分泌的多肽，可以收集分泌的蛋白培养、发酵和分离技术是本领域技术人员所熟知的。

生物反应器包括一个或多個可以培养细胞的容器生物反应器中的培养可以连续进行，具有连续流入反应器的反应物和连续流出反应器的细胞或者，所述培养可鉯分批进行生物反应器监测和控制环境条件，例如pH、氧气、流入和流出的流速以及容器内的搅拌，从而为培养的细胞提供最佳条件

茬培养表达目的多肽的细胞后，优选分离该多肽可以采用用于从细胞培养物中分离多肽的本领域已知的任何合适方法。为了从培养物中汾离多肽可能需要}