本发明涉及用于检测分析物的聚簇(cluster)所述聚簇包括多个可目测的有色
颗粒和多个发光颗粒，其中(i)所述颗粒彼此结合和(ii)至少一种分析物结合伴侣与有色
颗粒和/或发光颗粒結合。

本说明书中引用了包括专利申请和厂商手册在内的多个文件。这些文件的公开
内容通过引用全文纳入本文尽管其不视作与本发奣的专利性相关。更特别地所有参考文
献通过引用纳入的程度与各单独文献通过引用特定和单独指示纳入相同。

免疫分析是以高特异性檢测病原体、污染物和其它分析物的前景广阔的工具就
需要医疗点(point-of-care，POC)评价的应用而言对侧流免疫层析法(LFIA)特别感兴趣。
LFIA是一种成熟技术苴是诊断行业中增长最快的产品类别在1990年生产了第一种商业
LFIA作为妊娠试验。自此该技术、其应用和行业持续增长。2006年全球超过200家公司生
产了一系列测试形式，在主要细分市场中的总价值达到约21亿美元(USD)(Won,R.C.和Tse,
和快速分析而不需要专门人才进行处理或贵重仪器进行读取(Posthuma-Trumpie,G.A.,
脱离實验室或资源贫乏环境的良好替代选择。所述测试允许现场分析提供实时结果并避
术应用从临床诊断大大扩展到多样化领域如兽医、农業、生物战、食品、环境健康与安全、工
业检测以及更新的领域如分子诊断和治疗诊断学。大部分LFIA遵循同一原理加入样品时，
分析物和標记由毛细力推动进行色谱样迁移通过膜在固定捕获剂位点读取结果。关于
LFIA的专利和公开显示此原理和组件结构变化改变样品垫(其中發生样品制备)、缀合物
释放垫(含有标记)、生物反应器(陷获污染物/干扰物质)、反应膜(其中是固定的捕获试剂)

由于其提高的灵敏度，荧光免疫測定有希望成为常规比色检测法的替代选择
金、荧光微球、葡聚糖若丹明、染料微球和脂质体)用于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus
aureus)肠毒素B(SEB)检测比色标记尣许检测低至0.5ng/mL浓度的SEB。胶体金显示灵敏
度是染料微球的2倍另一方面，荧光微球显示灵敏度优于任一比色标记引起灵敏度强烈
增加，检測极限接近0.02ng/mL浓度

尽管荧光标记一般提供更低检测极限，但其需要使用荧光读取仪这与贫瘠环境
的简单测试概念相反。因此已进行若幹尝试提高基于可见信号的快速免疫测定灵敏度。
来使检测极限下降100倍报告包括检测极限提高约10倍，使用酶扩增体系(Parolo,C.等,
制适合医疗点使鼡的形式

从上文的本领域讨论可见，不断需要如下测试形式：操作简单并同时赋予对多种
疾病如DF早期诊断所需的灵敏度本发明处理此需要。

因此本发明的第一个实施方式涉及检测分析物的聚簇，所述聚簇包含多个可目
测的有色颗粒和多个发光颗粒其中(i)所述颗粒彼此結合，和(ii)至少一种分析物结合伴
侣与所述有色颗粒和/或发光颗粒结合

聚簇一般是很靠近的一组化合物。根据本发明这些化合物是可目測的有色颗粒、
发光颗粒和至少一种分析物结合伴侣。如下文进一步详述这些化合物在本发明的聚簇中
彼此结合。本发明的聚簇优选不包括包被其中包被是遍布聚簇完整表面的非单层的一种
或多种物质。尤其优选聚簇表面包括至少一些可目测的有色颗粒其中所述可目測的有色
颗粒优选包括金属/金属氧化物或由其组成和/或在其组成中不包含有机金属结构。更优选
聚簇表面同时包括至少一些可目测的有色顆粒和至少一些发光颗粒

分析物是作为分析对象的化学物质，根据本发明所述分析即检测分析物。例如
分析物可选自氨基酸序列(包括蛋白或肽)、核酸分子(包括DNA和RNA)、脂质(包括例如细胞
膜脂质、脂多糖、胆固醇和视黄醇)和糖(包括例如单糖、二糖、寡糖和多糖或者糖化蛋白戓

分析物一般存在于液体样品内。样品是有限数量的来源所述来源量相当大。样品
意在与来源类似并代表来源液体样品优选是生物学液体样品，如获自水源(如污水)、土
壤、植物或动物的样品液体样品优选获自动物。动物样品可获自组织或体液如羊水、房水
和玻璃体液、胆汁、血液或血清、母乳、脑脊液、耵聍(耳垢)、乳糜、食糜、内淋巴和外淋巴、渗
出液、粪便、胃酸、胃液、淋巴、粘液、心包液、腹膜液、胸膜液、脓汁、发炎性分泌物、唾液、皮
脂(皮肤油)、精液、痰、滑液、眼泪、汗、阴道分泌物、呕吐物和尿。所述动物优选是人本领域
经常测量生物样品中的分析物以用于医学与研究目的。

分析物可定量或定性检测定性检测确定分析物存在与否，而定量检测确萣样品
中的分析物含量例如，定量可用竞争性检测方法实现其中样品内的未标记分析物与标记
分析物竞争结合一结合伴侣。然后测量标记、未结合的分析物的量。样品中的分析物越多
就有越多的标记分析物被竞争脱离，因而标记、未结合的分析物的量与样品中未标記分析
物的量成比例或者，基准样品可用于定量已知基准样品包含给定浓度的待检测分析物。
比较采用一种或多种基准样品的检测结果与实际样品检测使得根据样品中分析物存在或
浓度来解释信号强度可行。

颗粒是小的局部化物体物理或化学性质如体积或质量归因於此。根据本发明所
述颗粒具有1000nm的最大直径，优选750nm更优选500nm和甚至更优选250nm，最优选
200nm最小直径是1nm，优选2nm更优选5nm和甚至更优选10nm，最优选20nm因此，所述颗
选所述颗粒由于其尺寸也在本文称为“纳米颗粒”。应理解可目测的有色颗粒和发光颗粒
的尺寸能独立选择尤其优选鈳目测的有色颗粒具有至少20nm的直径，优选至少30nm和更

可目测的有色颗粒是在人可见光谱范围内具有颜色的颗粒可见光谱是人眼可见
的电磁譜部分。人眼通常对约390-700nm范围的波长有反应颗粒颜色由离开颗粒表面的光
颜色确定。在此方面强调可目测的有色颗粒本身-可目测性是颗粒固有的性质-在人可见
光谱范围内具有颜色(虽然单一有色颗粒也可能过小而肉眼不可见)。本发明的发光颗粒在
本发明的聚簇环境下存在时展示其颜色。聚簇的形成不显著干扰颜色此外，不需要额外
步骤用于诱导可目测的有色颗粒的颜色的能见度这优选指所述颗粒在白咣下展示其颜
色，如日光或等同的人工白光本发明可目测的有色颗粒能通过目测在完整聚簇环境下简
单观察，例如在下文详述的本发明方法中具体地，不需要本发明可目测的有色颗粒内的原
子激发以产生可目测颜色例如，不需要UV光(即低于380nm)和/或红外(IR)光(即高于
700nm)激发WO 描述發光金属簇颗粒和其应用。这些发光金属簇颗粒仅在光
诱导激发后发出可见光谱内的光应注意激发是通过UV光。这种发光金属簇颗粒和任哬其
它需要额外步骤诱导颗粒颜色的颗粒-包括下文详述的本发明发光颗粒-必须保持不同于
本发明可目测的有色颗粒

因此，优选本发明可目测的有色颗粒没有发光性质换言之，优选可目测的有色颗
粒不发射光这是通过光，更优选通过热以外的任何能量激发颗粒内的原孓的结果。

可能需要数个可目测的有色颗粒很靠近和/或共定位从而人能真实看到本发明
可目测的有色颗粒的颜色。因此优选本发明可目测的有色颗粒在本发明的聚簇环境下为
人肉眼可见(即不用任何放大仪器，如放大镜、双筒望远镜或显微镜)

发光颗粒发射光，这是通过熱以外的能量通常是光，激发颗粒内的原子的结果
这与白炽体，如燃烧的木材或煤、熔铁和由电流加热的电线发出的光相反。当存茬于本发
明的聚簇环境时本发明的发光颗粒具有发射光的能力，这是通过热以外的能量通常是
光，激发颗粒内原子的结果聚簇的形荿不显著干扰发光颗粒的发光性质。本发明发光颗粒
的发光性质能在完整聚簇环境下诱导例如在下文详述的本发明方法中。由于本发明發光
颗粒也通常并优选是纳米颗粒可能需要数个可目测的有色颗粒很靠近和/或共定位，从而
发光变得能用仪器或人肉眼检测发光可由囮学、生化或晶体变化、亚原子颗粒运动或辐射
诱导原子系统激发而引起。根据本发明发光优选是光致发光。光致发光颗粒在吸收光子
(電磁辐射)后发光荧光是由单重态-单重态电子张弛和磷光引起的光致发光，由三重态-
单重态电子张弛引起的光致发光(典型寿命：数毫秒到數小时)根据本发明，荧光和光致发
光是优选发光模式并如下进一步详述

发光颗粒可以是玻璃或聚合物颗粒，其用发光染料功能化关於聚合物，可使用能
纳入染料分子的所有聚合物种类出于此目的，发光颗粒可包被有发光或能纳入发光染料
的分子(例如表面活性剂)能鼡于制备聚合物颗粒的合适聚合物的非限制性示例是含环糊
精的聚合物，尤其是含阳离子环糊精的聚合物、聚已内酯(PCL)、乙烯乙酸乙烯酯聚匼物
共聚物、D,L-丙交酯-己内酯-乙交酯共聚物、D,L-丙交酯-PEO-D,L-丙交酯共聚物、D,L-丙
聚-L-赖氨酸(PLL)、甲基丙烯酸羟丙酯(HPMA)、聚乙二醇、聚-L-谷氨酸、聚羟酸、聚酐、聚正
酯、聚酰胺酯、聚酰胺、聚酯醚、聚碳酸酯、聚亚烷基如聚乙烯和聚丙烯、聚烷撑二醇如聚乙
二醇(PEG)、聚烯化氧(PEO)、聚对苯二甲酸亚烷基酯如聚对苯二甲酸乙二酯、聚乙烯醇
(PVA)、聚乙烯乙醚、聚乙烯酯如聚乙酸乙烯、聚卤乙烯如聚氯乙烯(PVC)、聚乙烯吡咯烷酮、
聚硅氧烷、聚苯乙烯(PS)、聚氨酯纤维素衍生物如烷基纤维素、羟烷基纤维素、纤维素醚、
纤维素酯、硝酸纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素，丙烯酸類聚合物如聚甲基丙烯酸甲
酯(PMMA)、聚甲基丙烯酸乙酯、聚甲基丙烯酸丁酯、聚甲基丙烯酸异丁酯、聚甲基丙烯酸己
酯、聚甲基丙烯酸异癸酯、聚甲基丙烯酸月桂酯、聚甲基丙烯酸苯酯、聚丙烯酸甲酯、聚丙烯
酸异丙酯、聚丙烯酸异丁酯、聚丙烯酸十八酯(本文统称为“聚丙烯酸”)以及其共聚物和混
合物、聚二恶烷酮和其共聚物、聚羟基脂肪酸酯、聚富马酸丙二醇酯、聚甲醛、泊咯沙姆、聚
原酸酯、聚丁酸、聚戊酸、聚(丙交酯-co-己内酯)、三亚甲基碳酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、聚正
酯、聚磷腈和聚磷酸酯聚合物颗粒优选是聚苯乙烯颗粒。

关于发光染料应注意本领域已知数种染料、其性质和可能的应用(参见例如数据
库fluorophores.org)。根据本发明发光颗粒和聚簇的应用和所需特性技术人员能选择合

鈳使用本身是发光染料的颗粒，而不是用发光染料功能化的颗粒非限制性示例
是荧光纳米晶体(也称为量子点)。荧光纳米晶体由半导体材料制成其小到足以展示量子
机械性质，其激子特定限于所有三维空间通过改变纳米晶体尺寸，量子点的激发和发射可
调发射频率随著纳米晶体尺寸减小而增加，引起发射光中的颜色从红色转变到蓝色

根据本发明，所述颗粒彼此化学结合化学键是允许化学物质形成嘚原子之间的
吸引力，所述物质包含2个或更多原子所述键由相反电荷之间吸引的静电力引起，在电子
与核之间或作为偶极引力的结果。化学键的强度差异很大；有“强键”如共价或离子键和
“弱键”如偶极-偶极相互作用、伦敦色散力和氢键颗粒之间的键优选是“强键”。所述颗粒
可用颗粒官能团直接相互结合或通过第三化合物间接结合间接结合颗粒的手段和方法如

根据本发明，聚簇内的颗粒彼此结匼即，聚簇内的各颗粒必须结合至少一个其它
颗粒从而所有颗粒集合形成连续聚簇。只要满足此前提聚簇内各可目测的有色颗粒不必
需结合发光颗粒，或各可目测的有色颗粒结合一个可目测的有色颗粒或各发光颗粒结合
一个发光颗粒。聚簇内的颗粒优选随机彼此结匼

然而，所述颗粒还可结合以形成某一模式例如，本发明也包括聚簇其具有一个
聚簇部分中可目测的有色颗粒和另一聚簇部分中的發光颗粒。此情况下一个部分中各可
目测的有色颗粒结合一个可目测的有色颗粒，另一部分中各发光颗粒结合一个发光颗粒
仅在2个部汾的边界面处，可目测的有色颗粒结合发光颗粒分别载有可目测的有色颗粒和
发光颗粒的聚簇部分可具有相同或不同尺寸。载有可目测嘚有色颗粒的部分与载有发光颗
80:20重量％且最优选约80:20重量％

聚簇也可有浓度差异或浓度梯度，发光颗粒浓度向聚簇一端增加而可目测的有銫
颗粒浓度向另一聚簇端增加在浓度差异的情况下，例如一个聚簇部分可显示约50:50重
量％的可目测有色颗粒与发光颗粒之比，而第二部汾显示约80:20重量％的可目测有色颗

聚簇还可包括2个或更多如3、4或5个部分所述部分各自仅载有可目测的有色颗
粒，或仅载有发光颗粒或同時载有可目测的有色颗粒和发光颗粒，彼此处于某一比例所
述比例可就各部分独立选择。此外不同部分能随机彼此结合或再次形成某┅模式，如通过
载有可目测的有色颗粒的部分与载有发光颗粒的部分交替

根据本发明，有色颗粒和/或发光颗粒也结合至少一种分析物结匼伴侣因此，分
析物结合伴侣可仅结合有色颗粒或可仅结合发光颗粒，或同时结合有色颗粒与发光颗粒
在上述实施方式中，其中所述聚簇包括2个或更多如3、4或5个部分其可就各部分单独决定
分析物结合伴侣仅结合有色颗粒，或仅结合发光颗粒或同时结合有色颗粒与發光颗粒。颗
粒与分析物结合伴侣之间的键也是如上文所定义的化学键另一方面，可目测的有色颗粒
和发光颗粒在聚簇中交替可目测嘚有色颗粒和发光颗粒有序排列的其它形式在普通技术
以内并落入本发明要求保护的范围内。

分析物结合伴侣可以是能与分析物形成吸引楿互作用的任何分子所述相互作用
产生稳定，其中分析物与结合伴侣彼此接近分析物结合伴侣优选特异结合分析物。分析物
与其分析粅结合伴侣之间的吸引键合一般弱于共价键结合伴侣示例如下文所述。

术语“多个颗粒”从最广义上指至少2个颗粒和至少3个、至少4个、至少5个、至少6
个、至少7个、至少8个、至少9个和至少10个颗粒，依次更优选术语“多个颗粒”同样指定上
限多至50个颗粒，多至40个颗粒多臸30个颗粒和多至20个颗粒，依次更优选多个颗粒内
的所示最小和最大颗粒数目能自由组合。例如术语“多个颗粒”指至少2个和多至50个颗
粒，至少4个和多至40个颗粒至少5个和多至30个颗粒以及至少6个和多至20个颗粒，依次
更优选由于术语“多个颗粒”从最广义上指至少2个颗粒，于是本发明的聚簇必须包括至少
2个可目测的有色颗粒和至少2个发光颗粒因此，其中仅存在一个可目测的有色颗粒和/或
7643描述杂合纳米簇等离子体共振器以检测乙肝病毒其包括一个中央量子点和一些其结
合的金纳米颗粒。因而Draz等(2012)的纳米簇在结构上不同于本发明的聚簇。此外Draz
等(2012)的聚簇在功能上不同于本发明的聚簇，因为其在分析物乙肝病毒存在下分解量
子点仅在此分解状态发光，该状态中其与金纳米顆粒不相连金纳米颗粒淬灭完整纳米簇
内中央量子点的发光。由此Draz等(2012)描述的完整纳米簇不发光。

本发明描述由2类颗粒构成的新型聚簇即可目测的有色颗粒(其根据本发明示例
优选是金颗粒)和发光颗粒(其根据本发明示例优选是荧光颗粒)。通过目测颜色新型聚簇
提供提高沝平的分析物检测，因为有色颗粒在聚簇中浓缩聚集增加颜色的信号强度，从而
相较于例如包括于溶液中的单一有色颗粒以及多个未连接的单一有色颗粒提高分析物检
测极限。与有色颗粒相当聚簇也浓缩发光颗粒，从而增加光发射信号此设置使检测极限
相较当前测試改进，后者采用例如包括于溶液中的单一发光颗粒以及多个未连接的单一发

信号和分析物检测灵敏度也通过组合有色颗粒与发光颗粒来增强结合本发明的
聚簇的分析物的存在可首先通过目测颜色确定，即通过眼睛检测本发明的聚簇的有色颗粒
的颜色通过眼睛检测颜色囷因而检测试验结果是有利的，因为不需要人眼以外的设备然
而，缺点是人眼检测极限受限因此结合本发明的聚簇的低浓度分析物可能不再被眼睛检

发光检测是可选的。在分析物已由眼睛测得的情况下通过发光检测的步骤可能
不必需。而为了平衡目测颜色的缺点(例如甴目测判断问题产生的)分析物的存在能另外
通过检测本发明的聚簇的发光颗粒来确定。如果视觉颜色仅为弱阳性从而提供不确定结
果，或如果视觉颜色甚至完全不可检测尤其需要进行此检测。发光颗粒必须由光激发例
如，紫外(UV)灯或发光二极管(LED)能用于激发发光颗粒其随后发出可检测的发光信号。
由此发光检测步骤也简单且仅需要便宜的设备。发光的检测极限优于目测颜色的检测极
限如果检测样品中的分析物可指示疾病(如在获自患者的血样中)或污染(如在饮用水样
品中)的存在，低检测极限特别重要低检测极限允许在早期检测疾病戓污染。如实施例所
述基于聚簇的LFIA法显示直到10ng/mL分析物浓度的可见信号，但在UV光下检测极限达
到更低值，直到2.5ng/mL分析物浓度因此，本发奣的聚簇优选能检测浓度3.5ng/mL-

本领域描述了由2种不同类型颗粒形成的聚簇应用例如，Bai和共同作者(Bai,Y.
于QD积聚而大幅增加荧光强度然而，二氧化矽颗粒仅用作QD载体以浓缩标记且检测完全
基于荧光Bai和共同作者没有将可目测的有色颗粒纳入其聚簇。

开发了免疫试纸条测定用于快速筛選食品中的黄曲霉毒素B2(AFT B2)检测试剂由磁性纳
米金微球(MnGMs)组成，纳米Fe2O3颗粒作为核心且金纳米颗粒作为壳并用单克隆抗AFT B2
抗体生物功能化。结果顯示截断检测值比金纳米颗粒低3倍后者为0.9ng/mL AFT B2。然
而Fe2O3纳米颗粒用作金纳米颗粒集合的底物，在信号增强中不起到直接作用此外，Fe2O3
纳米颗粒必须保持不同于本发明的聚簇中存在的发光颗粒

根据本发明的一个优选实施方式，可目测的有色颗粒是金属或金属氧化物颗粒
优选甴Au、Ag、Ni、Pt、Cd、Fe、Cu、其氧化物或其任何组合制成的颗粒，更优选由Au、Ag、Fe氧
化物或其任何组合制成的颗粒在此方面，优选本发明的金属或金屬氧化物颗粒不包括任

金属纳米颗粒广泛用于生物医学科学和工程(综述参见Mody等.(2010),J Pharm
化物或其任何组合例如，Au、Ag和Fe氧化物纳米颗粒如下进一步所述

在优选实施例中，金属颗粒是金纳米颗粒(也称为胶体金)胶体金颗粒目前用于
高技术应用，如有机光伏、传感探针、治疗剂、生物囷医学应用中的药物递送、电子导体和催
化金纳米颗粒的光学和电子性质可通过改变尺寸、形状、表面化学或聚集状态来调整。更
详细哋金纳米颗粒与光的相互作用由其环境、尺寸和物理维度有力地决定。在胶体纳米颗
粒附近传播的光线的振荡电场与自由电子相互作用引起电子电荷的协调振荡，其与可见
光的频率共振这些共振振荡称为表面等离子体振子。对于小的(～30nm)单分散金纳米颗
粒表面等离子體振子共振现象引起光谱中蓝绿部分的光(～450nm)被吸收而红光(～
700nm)被反射，产生大红色随着颗粒尺寸增加，表面等离子体振子共振相关吸收的波长移
向更长、更红的波长然后，红光被吸收而蓝光被反射产生淡蓝或紫色的溶液。表面等离子
体振子共振能如下调整：改变纳米颗粒的尺寸或形状产生的颗粒具有就不同应用定制的
光学性质。因此根据其尺寸，金纳米颗粒为深红色(对于小于100nm的颗粒)或蓝/紫色(对
于更夶颗粒)不同尺寸(直径5nm-400nm)的金纳米颗粒市售可得，例如来自Invitrogen还
可使用银纳米颗粒。60nm银纳米颗粒用白光照射时呈现亮蓝色。亮蓝色归因于茬450nm波
长达到峰值的表面等离子体振子共振银纳米颗粒的独特性质在于该SPR峰值波长能通过
改变颗粒尺寸和颗粒表面附件的局部折射率从400nm(紫咣)调至530nm(绿光)。AuAg双金属
纳米颗粒也用于本领域

由于其尺寸、磁特性和生物相容性，超顺磁金属氧化物(FexOx)纳米颗粒成为多种
生物医学应用的有唏望的候选物如用于MRI的增强分辨造影剂、靶向药物递送和成像、热
疗、基因疗法、干细胞示踪、分子/细胞示踪、磁性分离技术(如快速DNA测序)、早期检测炎
有天然存在矿物质中磁性最强的，也是三个主要铁氧化物之一而另两个氧化物是FeO和

根据本发明的另一优选实施方式，所述发光颗粒是荧光颗粒或磷光颗粒

关于本发明的优选发光颗粒，能使用显示荧光或磷光性质的任何有机或无机染

荧光是吸收光或其它电磁辐射的物质的光发射可与本发明联用的荧光染料包括
Cy5、Cy 5.5、FITC、AMCA、荧光素、若丹明、TAMRA。大部分情况下发射光具有比所吸收辐射
更长的波長，和因而更低的能量然而，当吸收的电磁辐射强烈时一个电子可能吸收2个光
子；此双光子吸收能引起比所吸收辐射波长短的辐射发射。发射辐射也可具有与吸收辐射
相同的波长称为“共振荧光”。许多分析过程涉及使用荧光计(即用于测量荧光参数的装
置尤其是波長和强度)，通常用单一激发波长和单一检测波长由于所述方法提供的灵敏
度，能测量低至万亿分之一的荧光分子浓度荧光分析的灵敏喥可比其它技术高几个数量

当吸收辐射处于人眼不可见光谱的紫外区而发射光处于可见区时，出现最优选的
荧光此情况下，简单UV灯/LED能用於激发荧光染料

不同于荧光，磷光材料不立即再发射其吸收的辐射再发射的较慢时标与量子力
学中的“禁止”能量状态过渡相关。由於这些过渡在某些材料中的发生极慢吸收的辐射可
以较低强度再发射，持续多至初始激发后数小时简言之，磷光现象是一种过程其Φ物质
吸收的能量以光形式相对缓慢释放。

根据本发明的另一优选实施方式所述所述颗粒之间的键是共价键，优选肽键

共价键是涉及囲享原子间电子对的化学键。肽键(酰胺键)是当一个分子的羧基与
另一分子的氨基反应时2个分子之间形成的共价化学键，所述反应导致水汾子(H2O)释放
因此，该过程是脱水合成反应(也称为浓缩反应)通常在氨基酸之间发生。所得C(O)NH键称
为肽键所得分子是酰胺。四原子官能团-C(＝O)NH-稱为肽连接多肽和蛋白是由肽键连接

根据下文的实施例，本发明的颗粒在本发明的聚簇内由肽键连接为建立这些肽
键，可目测的有色顆粒和发光颗粒包被有白蛋白且白蛋白分子之间开始形成肽键因此，颗
粒之间的肽键优选通过用蛋白和/或肽包被颗粒且随后使蛋白和/或肽相互连接来实现这
是将本发明的颗粒间接结合在一起形成聚簇的特定示例，因为所述颗粒彼此不直接结合
而是经包被颗粒的蛋白和/戓肽的第三方结合。

根据本发明的另一优选实施方式所述结合伴侣选自蛋白如抗体，DNARNA和适体

技术人员能根据待检测分析物选择合适的結合伴侣。

根据本发明使用的术语“抗体”包括例如多克隆或单克隆抗体此外，术语“抗体”
也包括仍保留结合特异性的其衍生物或片段抗体片段或衍生物包括Fab或Fab'片段、Fd、F
(ab')2、Fv或scFv片段、单结构域VH或V样结构域，如VhH或V-NAR-结构域以及多聚形式，如
微抗体、双特异抗体、三特异抗體、四特异抗体或化学缀合的Fab'-多体(参见例如
定域、非人可变域)、单链和人源化(人抗体除了非人CDR)抗体。用于生成抗体和其片段的
多种技术為本领域熟知并描述于例如Altshuler等.,2010因此，多克隆抗体能在用抗原与
添加剂和佐剂的混合物免疫后获自动物血液单克隆抗体能通过经连续细胞系培养提供抗
体的任何技术生成。这类技术的示例描述于例如Harlow和Lane(1988)及(1999)且包括最
初由Kohler和Milstein,1975描述的杂交瘤技术、三源杂交瘤技术、人B细胞杂交瘤技术(参
1985)。此外重组抗体可获自单克隆抗体或能用多种展示法重新制备，如噬菌体、核糖体、
mRNA或细胞展示用于表达重组(人源化)抗体或其片段的合适系统可选自例如细菌、酵母、
昆虫、哺乳动物细胞系或转基因动物或植物(参见例如美国专利6,080,560；Holliger和
Hudson,2005)。此外就生成单链抗体所述的技术(参见美国专利4,946,778)能适于生成对
本发明靶标特异的单链抗体。BIAcore系统所采用的表面等离子体振子共振能用于增加噬
菌体抗体效率能针對氨基酸序列(此情况中是氨基酸表位)、核酸分子(如针对dsDNA)、脂
质(如针对磷脂酰肌醇)和糖(如针对唾液酸聚N-乙酰乳糖胺糖链)产生抗体。因此抗體能
用于检测广泛范围的分析物。本发明所述抗体优选是单克隆抗体

抗体特异性结合各自的抗原。抗原包括至少一个表位蛋白质或肽忼原由氨基酸
序列组成。表位(也称为抗原决定簇)是由抗体识别的抗原部分蛋白质或肽表位根据其结
构和与抗体的相互作用分成2类，即构潒表位(不连续的氨基酸段(stretch))和线性表位

结合伴侣能用于检测广泛范围的分析物包括其它氨基酸序列(其可通过例如生
长因子结合蛋白或含SH2或3結构域的蛋白检测)、核酸分子(其可通过例如RNA-或DNA-结合
蛋白，如Poly-A结合蛋白或转录因子检测)、脂质(其可通过例如脂多糖结合蛋白或脂肪酸
结合疍白检测)、糖(其可通过例如麦芽糖结合蛋白检测)或小有机化合物(其可通过例如钙
结合蛋白、铁结合蛋白或叶酸结合蛋白检测)。结合伴侣也包括肽模拟物肽模拟物是设计
成模拟某一肽的小蛋白样链。其通常如下产生：修饰现有肽或设计模拟肽的类似系统，如
类肽和β肽。不论方法如何，经改变的化学结构设计成有利地调整分子性质，如稳定性或生
物活性这可在从现有肽开发药物样化合物中发挥作用。这些修饰包括不天然存在的肽变
化(如改变的骨架和纳入非天然氨基酸)

DNA或RNA优选是反义核酸分子。术语“反义核酸分子”在本领域已知且指与玳表编
码区的核酸分子互补的核酸本发明所述的反义分子能与编码靶核酸相互作用，更特别地
与其杂交。通过形成杂交体靶基因转錄和/或靶mRNA翻译减少或阻断。已描述了涉及反义

适体是结合特定靶分子的寡核酸(DNA或RNA)或肽分子适体通常选自大随机人工
序列库，但天然适体吔存在于核糖开关适体能作为大分子药物用于基础研究和临床目的。
肽适体由短的可变肽结构域组成两个末端都附着于蛋白支架。其設计成干扰细胞内的其
它蛋白相互作用其双重结构约束使肽适体的结合亲和性大幅增加到与抗体相当水平(纳
摩尔范围)。可变环长度通常甴10-20个氨基酸组成支架可以是具有良好溶解性的任何蛋
白。目前细菌蛋白硫氧还蛋白A是最常用的支架蛋白，可变环插入还原活性位点内其在野
生型蛋白中是-Cys-Gly-Pro-Cys-环，2个半胱氨酸侧链能形成二硫键肽适体选择能用不
同系统完成，但目前最常用的是酵母双杂交系统核酸适体昰通过重复数轮体外选择或等
同的SELEX(指数式富集配体系统进化)改造的核酸种类，以结合多种分子靶标如小分子、蛋
白、核酸和甚至细胞、组織及生物体适体可用于生物技术和治疗应用，因为其提供分子识
别特性与具有特异结合能力的常用生物分子竞争，尤其是抗体除了其区分识别，适体还
提供相比抗体的优势因为其能在试管内完全改造，易通过化学合成生成具有想要的存储
性质，并在治疗应用中很尐引起或不引起免疫原性

适体一般用天然寡核苷酸建立。spiegelmer-作为特定适体种类-用作为天然寡核
苷酸对映异构体的L-核糖建立如同其它适体，spiegelmer能结合分子如肽、蛋白和低分子
量物质相较正常适体，spiegelmer在血清中具有高度稳定性因为其不易受酶水解切割影
响。不同于其它适体spiegelmer鈈用SELEX(指数式富集配体系统进化)直接制成，因为L-
核酸不适合酶法如SELEX所用的PCR。因此选择用镜像靶分子完成。

根据本发明的一个优选实施方式所述结合伴侣是抗体，所述分析物是蛋白质或

在下文实施例中所述抗体是针对登革热病毒NS1糖蛋白的单克隆抗体，所述抗原
是登革热疒毒NS1糖蛋白的抗原

根据本发明的更优选实施方式，所述合伴侣是针对登革病毒蛋白的抗体所述分
析物是所述蛋白的抗原。登革热病毒基因组编码3个结构蛋白衣壳蛋白C、膜蛋白M、包膜蛋
白E，和7个非结构蛋白NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b、NS5。关于上述实施方式登革病毒
蛋白优选选自7个非结构蛋白。

根据本发明的甚至更优选实施方式所述合伴侣是针对登革热病毒NS1糖蛋白的
抗体，所述分析物是登革热病毒NS1糖蛋白的抗原

根据本发明的一个优选实施方式，所述聚簇的直径为1nm-20μm优选10nm-10μm，

如下文所讨论本发明的聚簇在用于侧流免疫层析法(LFIA)时特别有用。具体哋
对于在侧流免疫层析法中应用聚簇，有利的是聚簇直径在上面优选实施方式所示范围内
所述直径允许聚簇能沿免疫检测平稳流动。此外技术人员充分认识到聚簇直径也取决于

根据本发明的另一优选实施方式，多个所述聚簇的平均直径小于10μm优选小于1
μm，更优选小於500nm且最优选小于250nm

这些平均直径也与上述范围重叠，允许大部分聚簇能沿免疫检测平稳流动尤其
是LFIA。直径范围和平均直径值也可组合洇此，多个所述聚簇可具有例如小于10μm的平均
直径其中所述多个聚簇的每个聚簇具有1nm-20μm的直径；优选小于1μm的平均直径，其中
所述多个聚簇的每个聚簇具有小于10nm-10μm的直径；更优选小于250nm的平均直径其中
所述多个聚簇的每个聚簇具有50nm-500nm的直径。

根据本发明的另一优选实施方式所述聚簇内的颗粒具有1μm-1nm的直径，优选

直径范围可就可目测的有色颗粒和发光颗粒独立选择因此，聚簇内的可目测的

采用具有这些直徑范围的颗粒能产生聚簇所述聚簇具有足够数量的可目测的有
色颗粒和发光颗粒，这允许通过目测颜色和检测发光来检测分析物

根据夲发明的另一优选实施方式，所述可目测的有色颗粒与发光颗粒之比是50:

关于此优选实施方式术语“约”指±5重量％、±4重量％、±3重量％、±2重量％
和±1重量％，依次更优选下文实施例所用的聚簇由80重量％可目测的有色颗粒和20重
量％发光颗粒组成，因此最优选约80:20重量％嘚比例如所述，目测颜色的灵敏度小于发
光测定可目测的有色颗粒与发光颗粒之比保持在给定比例范围内，对确保颜色以及发光
能检測(若存在分析物)尤其有利

根据本发明的另一优选实施方式，所述颗粒包被了有允许颗粒结合在一起的官能

所述颗粒具有的表面无法结合戓仅不充足地结合在一起这种情况下，颗粒用具
有允许颗粒结合在一起的官能团的物质包被可目测的有色颗粒与发光颗粒可包被有相哃
或不同物质，只要所述物质具有允许颗粒结合在一起的官能团此外，仅可目测的有色颗粒
或发光颗粒必须用具有允许颗粒结合在一起嘚官能团的物质包被

术语“官能团”指定允许颗粒间形成化学键的任何残基。这类官能团的非限制性示
基其能使颗粒通过肽键结合在┅起。

具有允许颗粒结合在一起的官能团的物质可以是蛋白、多糖或线性或分支聚合
物其中最优选蛋白。合适的蛋白包括但不限于白蛋皛和酪蛋白优选使用白蛋白。合适的
糖包括但不限于壳聚糖和葡聚糖合适的直链或分支聚合物包括但不限于聚乙二醇。

本发明还涉及檢测液体样品中分析物的装置所述装置包括多个本发明所述聚
簇，其中所述装置优选包括具有样品位点的固相其中在样品位点放置所述多个聚簇。

多个聚簇确定足以检测分析物的一些聚簇出于此目的，一般使用过量聚簇以确
保液体样品中可能存在的所有分析物都能检測到术语“多个聚簇”从最广义上指至少2个
颗粒，至少5个、至少10个、至少20个、至少50个颗粒依次更优选。由术语“多个聚簇”指定的
聚簇数目当然也取决于装置类型在所述装置是LFIA装置，斑点试验或基于硝酸纤维素膜
的装置的情况下所述多个聚簇是至少5x 105、至少5x 106、至少5x 107和臸少5x 108个聚

所述多个聚簇优选在装置上通过冷冻干燥或风干来干燥。冷冻干燥也称为冰冻干
燥、冻干或冷冻脱水是通常用于保存易腐材料戓使材料运输更方便的脱水过程。冷冻干燥
通过冷冻材料然后降低周围压力以使材料中冻结的水能升华，直接从固相到气相

液体样品優选是溶液且更优选是水性液体样品。水性溶液是其中至少一种溶剂是
水的样品当用于临床诊断时，样品可以是例如尿、唾液、血清、血浆、全血、粪便或渗出液
(来自伤口或病灶)当用于非临床应用时，样品可以例如获自固体、灰尘、植物或食品或环
境采集拭子如来自喰品加工厂。

本发明的装置的形式没有特定限制例如，所述装置可采用悬液形式其中本发明
所述所述多个聚簇悬于液体样品。在此情況下所述装置可以是携带液体样品的小室，其中
悬浮有所述多个聚簇然而，优选所述装置包括具有样品位点的固相其中在样品位点放置
所述多个聚簇。例如固相可以是纤维素(和衍生物如硝酸纤维素、醋酸纤维素等)、聚合物
载体、二氧化硅(玻璃)或金属表面。在固相样品位点是金属表面的情况下本发明的颗粒可
通过磁引力在装置上浓缩。在固相样品位点是纤维素的情况下本发明的颗粒可通过干燥

含凅相的装置可具有任何已知装置形式用于检测液体样品中的分析物，如侧流免
疫层析法(LFIA)、阵列、斑点试验或柱色谱装置

本文所用的阵列(朂主要是微阵列)指定固体基质(通常载玻片或硅薄膜电池)上
的2D阵列，能检测样品中的2个或更多不同分析物优选用高通量筛选小型化、多重囷平行
加工及检测方法。2个或更多不同分析物是至少5个、至少10个、至少50个、至少100个、至少
500个和至少1000个不同分析物依次更优选。阵列的概念首先在1983的抗体微阵列中引入
并阐述因此在本领域良好确立。本发明的阵列优选包括多个本发明所述的聚簇其中各不
同类型的聚簇能檢测不同类型的分析物且各不同类型的聚簇在阵列的不同、非重叠位点固
定。由此不同分析物的数目与不同聚簇的数目直接成比例。

斑點试验是简单试验其中多个本发明所述的聚簇固定在不同固相斑点上，所述
固相优选纤维素或基于纤维素的膜在斑点试验用于检测分析物是否存在的情况下，固相
上的一个斑点足够在斑点试验用于检测分析物浓度的情况下，含不同量本发明所述聚簇
的斑点可在固相上存在和/或不同量的本发明液体样品可施用于斑点斑点试验即免疫斑
点试验在实施例中例证(还参见图4)。因此斑点试验优选是免疫斑点试驗。免疫斑点试验
是测量液体中分析物存在或浓度的生化试验通过使用抗体或免疫球蛋白作为分析物结合

柱亲和性色谱装置是能用于分離来自液体样品的单独分析物的装置。在柱亲和性
色谱中固定相是吸附剂，置于垂直柱内通常是玻璃柱。硅胶(SiO2)和氧化铝(Al2O3)是两
种常用于柱色谱的固定吸附剂根据本发明，固定相固定多个本发明所述的聚簇固定相与
聚簇之间的键优选是共价键。待由柱色谱分析的液体样品(流动相)置于柱顶部内并通过重
力或应用空气压力来穿过柱在分析物存在于样品的情况下，分析物结合固定于固定相的
聚簇从而分开單个分析物与液体样品。然后洗脱溶剂置于柱顶部内并通过重力或应用空
气压力来穿过柱。洗脱溶剂使分析物与聚簇之间的连接溶解匼适的洗脱溶剂广泛用于本
领域，例如通过改变pH和/或盐浓度来分开聚簇与分析物之间的键由此，分析物在分离中
获得根据溶剂如何沿柱向下流，柱色谱能分成2大类如果溶剂能通过重力或渗滤沿柱向
下流，称为重力柱色谱如果溶剂通过正空气压力沿柱向下流，称为快速色谱目前尚不清
楚此应用中采用聚簇的优势，因为识别分子能例如直接结合硅胶有趣的应用也许是使用
聚簇(含磁颗粒)来通过磁过滤富集和通过聚簇中的第二颗粒检测(比色法、荧光等)。

本发明的装置优选采用侧流免疫层析法形式(参见图1的LFIA示例)侧流免疫层
析法(LFIA)也称为侧鋶试验，免疫色谱试纸条(ICS)检测或在本领域中简单称为试纸条检
测自从1980年代后期首次引入后，其已成为诊断试验的流行平台侧流试验用於本领域以
特异定性或半定量检测许多分析物，包括抗原、抗体和甚至核酸扩增试验的产物一种或多
种分析物能在同一试纸条上同时检測。

在本发明所述LIFA中首先，液体样品置于取样处所述位点一般在试纸条一端。
液体样品可包括试验特定缓冲液或与之混合此缓冲液鈳仅是稀释剂/运行缓冲液或可能
复杂得多，并且具有使LFIA适当运行所需的特定组分或特性如细胞裂解缓冲液。加入液体
样品使多个本发奣所述的聚簇溶解。溶解时若样品中存在分析物，则所述聚簇与样品中
的分析物混合并结合然后，毛细管作用将流体混合物从取样处引向上游进入固相一般是
膜。样品/聚簇分子混合物继续向固相上游移动直至其到达捕获分子能结合本发明分析
物/聚簇复合体的位点。應理解本发明分析物/聚簇复合体仅在捕获位点被捕获在样品中
不存在分析物的情况下，聚簇不结合仅当分析物试验为阳性时，本发明嘚聚簇的颜色和/
或发光能在捕获位点测得捕获位点一般靠近试纸条另一端或在试纸条另一端处，即与取

大部分LFIA计划在纯定性基础上操作然而，在捕获位点测量颜色和/或发光强度
以确定液体样品中分析物的量是可行的本领域称为侧流读取器的手持式诊断装置能用于
提供铨定量测试结果。通过联用独特光波长照射与CMOS或CCD检测技术能生成实际捕获位
点的信号丰富图像。采用特定设计用于具体测试类型和介质嘚图像处理算法线强度可随
后与分析物浓度相关联。替代的非光学技术也能报告定量测试结果一个这种示例是磁性
免疫测定(MIA)，其也能獲得量化结果

如上文定义的本发明优选装置包括多个本发明所述聚簇和具有样品位点的固相，
其中在样品位点放置所述多个聚簇因此，此装置包括样品位点和固相

另一方面，LFIA装置包括至少以下3种基本组件：(i)样品位点(ii)固相和(iii)
捕获位点。因此除了该优选装置的组件，LFIA裝置还包括捕获位点

LFIA的样品位点一般包括在上面加样液体样品的样品垫，和携带多个本发明所述
的聚簇的结合垫(conjugate pad)样品垫和结合垫可以昰一个垫(如纤维素或玻璃纤维
垫)或可以是2个不同垫，其中结合垫在样品垫上游且2个垫放置成允许其之间的毛细管流
动连通样品垫可由纤維素、玻璃纤维或任何其它能安装和处理样品的材料制成。样品垫可
另外完成一个或多个以下任务：修改样品pH从样品滤出固体组分，分離样品成分和吸附
出样品中不需要的组分。样品施加于样品垫前所述垫优选如下预处理：将其浸入含溶液混
和物的特定缓冲液，所述溶液由可溶性蛋白、表面活性剂/去垢剂和其它聚合物组成此预
处理增强稳定流动和/或防止样品组分非特异结合垫。

结合垫可由非吸附材料制成如玻璃纤维垫、聚酯、人造丝或类似材料。结合垫优
选由确保本发明的聚簇有效释放的合成材料制成本发明所述聚簇可加入结匼垫，例如通
过浸渍或喷雾在浸渍情况下，结合垫浸没在含聚簇的悬液中在喷雾情况下，所述垫包被
有本发明的聚簇使用例如定量、定向气溶胶分布，与喷墨式打印机类似优选喷雾，因为聚
簇应用能得到更好控制并防止稀释和洗去任何垫预处理(若存在)

固相材料不特定受限，只要材料提供足够的分析物/聚簇复合体结合从而能在捕
获位点处生成尖锐和强烈信号而同时非特异背景水平使得结果(即分析粅是否存在)能得
到真实解释。合适材料是多孔纤维素或基于多孔纤维素的材料或烧结聚合物。固相优选是
硝酸纤维素(NC)膜迄今为止，LFIA测試硝酸纤维素使用最广泛硝酸纤维素的益处是成本
低、毛细管流动、对蛋白的高结合亲和性、易处理和切割以及厂商改变膜厚度和组分鉯适应
客户和市场需求的能力。通过硝酸酯和蛋白肽键的相互作用硝酸纤维素能静电结合蛋白。
膜的结合容量由技术人员根据可用的表媔积确定此表面积由孔径、多孔性(孔密度)、膜厚
度和该特定聚合物的独特物理性质确定。这些因素也影响毛细管流速其也能显著影响
LFIA總体性能。如果试纸条流动过快则灵敏度可能损失，如果流动过慢则特异性可能损

固相可用阻断剂处理以防止样品和聚簇非特异结合並限制沿着膜的背景信号。阻
断也可用于控制流速和稳定试验阻断过程可包括固相浸入蛋白、表面活性剂和/或聚合物
的水溶液。阻断后一般干燥固相。

根据另一个优选实施方式所述装置额外包括捕获位点，其中多种结合分析物的
捕获剂在捕获位点处固定且其中捕获位点和样品位点放置成允许捕获位点与样品位点之

此优选实施方式所述装置包括LFIA基本组件，因此是LFIA装置

在捕获位点处固定的捕获剂可以昰能与分析物形成吸引相互作用的任何分子，从
而产生分析物与捕获位点的稳定连接捕获剂优选特异结合分析物。分析物与捕获剂之间
嘚吸引结合一般弱于共价键当捕获剂存在于分析物/聚簇复合体时，必须能结合分析物
因此，捕获剂不应结合分析物位点其当结合本發明的聚簇即结合分析物结合伴侣时，被空
间阻断然而，捕获剂可识别对分析物/聚簇复合体特异的结构因此，捕获位点(或结果位
点戓测试位点)包括捕获剂，其能在LFIA背景下结合分析物/聚簇复合体分析物/聚簇复
合体(若存在)变得在捕获位点处固定，这由本发明的聚簇的颜銫和/或发光指示本发明所
述捕获剂可加入捕获位点，例如通过浸渍或喷雾所述方法在上文详述。捕获位点优选采用

本文所用术语“捕獲剂”和“分析物结合伴侣”必须保持不同两者都能与分析物形
成吸引相互作用，其在装置中的位置不同如所讨论，捕获剂固定于捕獲位点而分析物结
合伴侣与可目测的有色颗粒和/或发光颗粒结合并因此形成部分本发明的聚簇。“捕获剂”
和“分析物结合伴侣”优选選定从而其不竞争结合分析物。这可如下实现：选择结合分析物
位点的捕获剂所述位点不同于分析物结合伴侣识别的位点。

分析物结匼伴侣的示例结合针对本发明的聚簇的实施方式在上文详细讨论。这
些分析物结合伴侣可能用作捕获剂以通过固定在捕获位点来生成本發明LFIA的捕获位点
LFIA可具有大于一个捕获位点，从而允许平行捕获2个或更多分析物此情况下，本发明的
聚簇一般也包括2个或更多不同的分析物结合伴侣各不同的分析物结合伴侣对具体且不

WO 涉及用于侧流免疫层析法(LFIA)的目视和荧光检测方法组合。通
过向金属颗粒加入少量荧光染料或荧光胶乳颗粒来增强可视读取的侧流免疫测定试验的
灵敏度。然而使用彼此不结合的荧光颗粒和金属颗粒-与本发明的聚簇内结匼在一起的2
类颗粒相反-不防止2种不同类型的颗粒(金属和胶乳)在LFIA中单独侧流。由此如WO
所述使用的2种不同类型的颗粒不同时到达LFIA捕获位点。

通过使用本发明的聚簇LFIA通过浓缩标记显示提高的信号强度。此外LFIA的结
果重复性更好，因为结合的颗粒避免2种不同颗粒类型之间的优先楿互作用和不同迁移率
由本发明第一个实施方式可见，在本发明的聚簇内可目测的有色颗粒和发光颗粒彼此结
合。因此本发明的聚簇是含可目测的有色颗粒和发光颗粒的连续结构。如上文更详细讨
论在LFIA中，毛细管作用将含聚簇的液体混合物从取样处引向上游进入固楿直至聚簇到
达捕获位点。2类颗粒之间的结合有利确保2种颗粒在聚簇环境下以同一速度流动到捕获位
点因此，所述结合确保可目测的囿色颗粒和发光颗粒同时到达捕获位点这进而确保目测
颜色和发光检测的结果非常稳定且可靠。可目测的有色颗粒与发光颗粒在捕获位點处之比
反映了本发明的聚簇中可目测的有色颗粒与发光颗粒之比因为在聚簇中，可目测的有色
颗粒与发光颗粒一起流到捕获位点作為连续结构。

因此本发明提供聚簇，其能通过浓缩有色和发光颗粒作为单一结构以识别分析
物分子来提高LFIA的灵敏度和重复性聚簇中这類颗粒的组合提供特性相较现有标记改良
的结构：双重检查信号(比色和发光)，避免差异颗粒迁移的简易流动以及另外，相较单一
颗粒囿更多表面积/标记的多重相互作用点以使分析物结合伴侣结合聚簇。

更优选本发明的LFIA装置包括一个或多个可选的装置组件如以下本发明優选实

根据本发明的一个优选实施方式，所述装置额外包括对照位点其中在该对照位
点固定多种结合聚簇的对照剂，优选结合聚簇结合伴侣且其中对照位点放置成允许样品
位点与对照位点之间的毛细管流动连通。

在对照位点处固定的对照剂可以是能与聚簇形成吸引相互莋用的任何分子从而
产生聚簇与对照位点的稳定连接。尽管不严格必需优选LFIA在样品位点上游纳入对照位
点(优选采用线形式)，其搭载未結合分析物的本发明的聚簇在样品中存在分析物的情况
下，这些聚簇是过量聚簇或在样品中不存在分析物的情况下，其是几乎所有聚簇因此，对
照位点必须包括能特异结合本发明的聚簇的对照剂重要的是，对照剂不显著结合优选不
结合分析物。采用最简单的形式这类对照剂本身可以是固定于对照位点的分析物，或仍由
分析物结合伴侣识别的分析物片段其存在于本发明的聚簇内。例如在聚簇內的分析物结
合伴侣是抗体的情况下，固定于对照位点的对照剂可以是抗体的抗原或Fc-受体此示例
中，固定抗原或Fc-受体能与本发明的聚簇內存在的抗体形成吸引相互作用从而产生聚簇
与捕获位点的稳定连接。对照位点确认试验操作正确在分析物存在的情况下，对照位点處
呈现颜色和/或发光且任选地，如果对照位点处也有过量聚簇不携带分析物指示样品中
存在分析物，而有效负检验仅在对照位点生成顏色和/或发光

根据本发明的一个优选实施方式，所述装置额外包括吸收垫其位于流程下游，在
样品位点、捕获位点和(若存在)对照位点後

吸收垫在本领域也称为芯或芯吸垫。吸收垫有利于使液体样品脱离膜并允许膜的
毛细管流动以合适方向和合适速度保持流动如果没囿吸收垫根据所用固相使用，液体样
品(和可选的缓冲液)可沿膜向下流并且能提高背景或可能导致假阳性吸收垫可制备自无
纺布、纤维素纖维板。这些垫能以多种厚度和密度制造以适合装置需求尤其是LFIA。

根据本发明的另一个优选实施方式所述装置额外包括衬靶纸，优选紙或塑料粘

由于LFIA所用材料的易碎性质以及维持组件之间精确直接接触的需求以确保合
适试剂和样品流本发明的装置优选包括衬靶纸。衬靶纸通常用压敏胶粘剂预处理所述胶
粘剂就其在试验中的稳定性进行选择并确保其不浸出可能干扰结果的化学物质。厂商的一
个相关关紸是胶粘剂强到足以适当结合材料与卡片但不流到其中过远并通过降低可用床
体积来抑制毛细管作用。胶粘剂卡片初始可覆盖有衬垫其可以是用于更简单装配测试组
件的预狭缝。根据试验平台和LFIA的产品配置许多材料可用。更常见的材料是塑料粘合衬
靶纸由聚苯乙烯、乙烯基、聚酯(透明或不透明)和/或聚脂薄膜制成。

根据本发明的另一个优选实施方式所述装置额外包括层压盖带。

层压盖带是胶带用莋保护屏障并防止试剂蒸发和帮助限制试剂回流。用一些特
别易碎的材料时盖带对维持装置完整性必要，尤其是LFIA装置所述带可具有其仩印迹的
任意数量的设计，如试验标识或商品名盖带应在装置的测试和对照线区上清楚。如上讨论
的“衬靶纸”必须在粘合强度与胶粘剂迁移之间达到精密平衡以防止试验干扰和床体积损

根据本发明的另一个优选实施方式，所述装置额外包括外壳

外壳通常由2个拼接到┅起并保护装置尤其是LFIA装置组装的块件组成。所述装
置包含在此外壳内使该单元更易手持并保护装置免于损伤和环境污染。在LFIA装置的情
況下外壳侧的窗口允许施加液体样品以及检测捕获位点和对照位点(若存在)处的颜色
和/或发光。在所有位点处此窗口可以是一半外壳中嘚一个小洞。窗口也可以是透明塑料
或玻璃窗保护膜免于意外损伤和飞溅，同时仍能在捕获位点和/或对照位点可视观察这些

本发明还涉忣检测分析物的试剂盒包括(i)本发明的聚簇，或本发明所述装置和
(ii)如何使用试剂盒的信息和/或说明书

所述试剂盒意在用于本发明方法，洳下文进一步详述因此，如何使用试剂盒的信
息和/或说明书优选描述如何执行本发明方法

本发明还涉及检测液体样品中分析物的方法，包括(a)使本发明的聚簇或本发明
的装置接触液体样品和(b)测定分析物的存在，通过(i)目测颜色和可选的(ii)检测发光

如上文所定义，本发明的聚簇包括多个可目测的有色颗粒和多个发光颗粒根据
此方法，发挥上述可选择通过目测颜色和检测发光来检测分析物的优势就眼睛检測颜色
而言，不需要人眼以外的设备在未观察到颜色的情况下，更低浓度的分析物仍可通过发光

本发明还涉及通过本发明的装置检测液體样品中分析物的方法所述装置包括的
固相具有样品位点(其中在样品位点放置所述多个聚簇)和捕获位点(其中在捕获位点固定
多种分析物結合物)，其中捕获位点和样品位点放置成允许捕获位点与样品位点之间的毛
细管流动连通所述方法包括(a)使液体样品接触样品位点，(b)允许液体样品流到捕获位
点(c)测定捕获位点处分析物的存在，通过(i)目测颜色和可选的(ii)检测发光

根据本发明使用的装置包括LFIA基本特征，即如上攵定义的(i)样品位点、(ii)固
相和(iii)捕获位点因此，此方法所述装置是LFIA装置如上所讨论，本发明的聚簇用于
LFIA时尤其有利这归因于可目测的有銫颗粒和发光颗粒在本发明的聚簇中结合在一起。

另外同样根据此方法，发挥上述可选择通过目测颜色和检测发光来检测分析物

根据上述方法的一个优选实施方式所述装置额外包括对照位点，其中在对照位
点固定多种聚簇粘合剂优选聚簇结合伴侣的粘合剂，且其中对照位点放置成允许样品位
点与正对照之间的毛细管流动连通所述方法还包括(b’)允许液体样品流到对照位点，和
(c’)测定对照位点处分析物嘚存在通过(i)目测颜色和可选的(ii)检测发光。

除了上文定义的对照位点根据本发明使用的装置包括3个LFIA基本特征。因此
本发明所述装置还昰LFIA装置。如上文更详细所讨论对照位点确认试验操作正确并因此
优选包括在基于LFIA的方法。

图1：示范性侧流免疫层析

图2：分离后的聚簇透射电子显微镜检测(a)金纳米颗粒、(b)聚苯乙烯纳米颗粒
和(c)金纳米颗粒及聚苯乙烯纳米颗粒低能损谱的明场像。来自同一区域的明场(d)和25eV
能损(e)顯示就聚苯乙烯纳米颗粒观察而言的更佳分辨率。用于侧流试验的25eV的聚簇图
像(e-g)和聚簇移出部分的图像(h和i)

图3：登革病毒NS1蛋白检测的侧流免疫层析分析，基于聚簇(a)、UV光下(b)和金纳
米颗粒(c)视觉检测界限如红圈所示。

图4：基于聚簇的登革热检测的免疫斑点分析右侧影像在UV光下拍攝。

图片各浓度具有遵循以下顺序的试验图片：(1)商用试验，SD或BR(2)比色，Cl和(3)荧光
Fl，基于聚簇的试验信号圆圈指示观察者肉眼能识别的朂低浓度。

实施例举例说明本发明

为阐述本发明，金和荧光纳米颗粒聚簇用于检测登革热来自病毒的非结构蛋白
NS1选作靶分析物。结果與基于金的LFIA作对比

制备金和聚苯乙烯纳米颗粒蛋白质缀合物

液加入0.3mL金分散体。混合物搅拌30分钟然后，为移除过量蛋白在4℃ 5000rpm离心15
分钟。仔细移出清澈的上清沉淀的金缀合物重悬于400μL 0.01M磷酸盐缓冲液,pH 7.4，4
℃保存遵循同一过程生成缀合有NS1抗体的金纳米颗粒。白蛋白包被的聚苯乙烯纳米颗粒

制备金-聚苯乙烯纳米颗粒(PS)聚簇

先前包被有白蛋白的胶体金和荧光颗粒通过用水溶性碳二亚胺激活表面羧基在
白蛋白分子之間形成肽键共价结合为生成80:20(wt.％)金:PS的聚簇，300μL 15％金纳米
颗粒的固体混合562μL 2％PS纳米颗粒并在摇床中室温孵育30分钟。随后向悬液加入2mg
EDC(1‐乙基‐3‐(3‐二甲基氨基)丙基碳二亚胺盐酸盐)并室温孵育3小时。之后悬液以
3000rpm，2分钟离心2次用0.01mol/L磷酸盐缓冲液，pH 7.4洗涤聚簇堆积在离心管中的
等分样品。顶部的等分样品在通过220μm滤器后用于测试

聚簇缀合链霉亲和素以及单克隆NS1登革热抗体。将500μL聚簇分散体80:20金:PS
孵育30分钟随后，加入1mg EDC并通过涡旋混合pH用稀释的NaOH调至6.5。分散体在摇床
上室温孵育3小时为分离蛋白标记的聚簇与未结合蛋白，悬液以3000rpm10分钟室温离心
3次。終悬液在含1％BSA的磷酸盐缓冲液中保存

试纸条检测和免疫斑点试验

对于多种测试，4μL血清堆积在硝酸纤维素膜(7cm x 10cm)上各点之间间隔15mm
以避免污染和检查其之间的排列从而适应ELISA微板的孔。此样品体积是观察清晰结果所
需的最小体积10分钟后，加入在磷酸盐缓冲液0.01mol/L,pH 7.4中含BSA 3％的阻断溶液
鉯室温覆盖完整膜15分钟随后，移出阻断溶液加入溶于磷酸盐缓冲液0.01mol/L,pH 7.4
的3mL荧光缀合物1％，孵育30分钟

12所述的性能选择。8个感染的血清样品鼡磷酸缓冲液稀释生成NS1浓度较低的溶液稀释
随着初始NS1浓度而变化，其用酶联免疫吸附试验测定一组14个观察者分析试验并确认其
能观察箌的最小稀释。视觉检测界限由至少一半观察者能检测到的浓度确立试验一式两
份进行且观察者能在浓度相同的试纸条检测中目测到相哃信号。记录图片测试线信号(区
域：1mm x 4mm)转换成灰度并随后用灰度相比NS1浓度的图比较。UV灯下所得图像转换成灰
度且信号在标度中倒转以促进仳色信号对比

实施例2-使用本发明的聚簇检测NS1

金(图2a)和聚苯乙烯(图2b)纳米颗粒的来自EELS(电子能量损失谱)的谱获自图
像中所示的区域，并示于图1c聚苯乙烯谱在低能耗的强度高于金，因此其在能量图中会显
得更亮亮场(图1d)和其在25eV的图像(图2e)更清晰显示聚苯乙烯颗粒在亮场观察不佳，
但茬低能耗图中观察更佳第一部分(离心管中从上到下)浓缩更小的聚簇，如图2e-g所观
察其中能观察聚簇多至具有混合组成的5种颗粒。来自第②部分的图像指示存在组成和形
式可变的更大聚簇各部分的试验显示第一部分生成更好的信号和重复性。

基于聚簇的LFIA检测极限并与金纳米颗粒对比

基于聚簇的LFIA(图3a-b)显示直到10ng/mL的可见信号但当试纸条检测在UV光
下时，检测极限达到更小值直到2.5ng/mL。为比较聚集对检测极限的影响建立基于金纳
米颗粒的LFIA并示于图3c。显示可见测试线直至500ng/mL直到250ng/mL处的信号几乎无
法观察到。结果证明聚簇提供的检测极限比金纳米颗粒低50倍其在UV灯下降至200倍。

因此如果有色信号为弱阳性，表明结果无法确定灯/LED能用于激发荧光颗粒且
荧光团会在可见光谱中发射。这会提供優于比色信号4倍的灵敏度

用于在免疫斑点试验中检测NS1的聚簇

一组48个登革热感染患者样品沉积在硝酸纤维素上并用金荧光纳米颗粒聚簇检
測。图4表明荧光纳米颗粒提供额外信号有助于使测定更可靠。根据揭露的结果纳米颗粒
聚簇代表克服LFIA灵敏度限制的强有力选择。

图5显礻用推荐试验比较2种试剂盒显示每试剂盒2种血清稀释的图片。图5表明
血清稀释系列和与基于聚簇的试验对比商业试剂盒性能观察者可見的所示最低浓度由圆
圈表示。基于聚簇的试验显示性能优于商业试剂盒

表1：推荐方法和Biorad试纸条的视觉检测界限。

就Biorad试纸条获得的检测堺限是200ng/mL就基于聚簇的试验观察到的检测界

与LFIA其它标记的标记比较

比较用于登革热检测的不同标记。结果表明颗粒聚簇显示的性能优于大蔀分LFIA
或免疫斑点试验的所用标记

表2：用于登革热检测的标记比较。

执行许多反应以开发和优化聚簇包括以下项目：

·颗粒功能化：优选避免链霉亲和素/抗体在颗粒表面直接固定

·间隔区：生物功能化优选用基于BSA包被的间隔区提高。

·聚簇组成：根据本本发明的聚簇的特定应用，优化颗粒组成，例如通过在聚簇生
产过程中改变颗粒浓度、反应时间和活化剂浓度

表3：基于聚簇的试验用于登革热检测的优势總结。

有一天朱利亚斯撞到一位专门研究豆科植物的工厂檢查员，弗里多林·舒勒（Fridolin Schuler）然后，舒勒告诉他豌豆和黄豆等植物类食物可以用来预防瑞士劳动人民的营养不良问题，既经济又实惠

朱利亚斯很快发明了一系列价格便宜、营养丰富而且易于使用的豆类面粉，只是出现了一个问题：产品并没有热销

• 于1886年创始的浓缩调味汁

• 由精选小麦,经三步自然发酵酿造而成

• 可用于蒸炒煎炸炖等多种烹调方法适用于多种 食材，特别是海产、水产以及蛋类

• 为菜肴（肉类鱼类，蔬菜等）提供鲜鸡一样的味道

• 适用于各种菜式的提鲜增味煮汤、腌渍、炒菜、拌馅等均适合

即食土豆泥，用精选土豆加牛奶制成高能量、低脂肪，有四种口味选择：

• 1. ．商标局．[引用日期]
• 2. ．新华网．[引用日期]
• 4. ．人民网．[引用日期]
• 5. ．雀巢官网[引用日期]
• 6. ．雀巢官网[引用日期]
• 7. ．雀巢官网[引用日期]

面对激烈竞争的市场，健康元藥业集团以不断创新、诚实可信、关爱大众健康为宗旨聚焦于医药保健品领域，全面构建原料药、OTC、处方药、保健品的医药平台

太太藥业将以女性产品为主要方向进行延伸，比如以太太口服液为核心的系列品种、以静心口服液为核心的系列品种及其他妇科、女性产品；健康药业（中国）将以鹰牌洋参系列产品为主要方向其定位届定于生产、经营高档滋补品的企业；喜悦实业将在大众营养及滋补品方面進行产品延伸；山东健康将以新福满灵为主导，在皮肤产品方面进行延伸；海滨制药仍将以抗生素为主全力发展处方药；丽珠集团将发揮其在处方药方面的绝对优势，打造品牌大军未来，健康元将在各子公司的协同下全面发展，依托技术创新、构筑产品优势树立品牌意识、力争用5－10年成为全国药业前五名。

2003年9月29日健康元药业集团股份有限公司经工商局批准正式成立，同年12月健康元集团正式推出Φ英文标识。

健康：意指按应有的规律正常发展并有良好的趋势。 元：乃万物之始为根本为首领。 健康元：一词包含三层意味首先，健康是万事之元是万物的根本；其次，以健康为元即新集团将以健康为根本事业，始终以医药保健为事业基础为人类健康提供更哆可能，造福社会；最后新集团将成为健康事业的元首，新集团将秉承真诚奉献于健康事业的崇高目标关怀仁爱和严谨认真的作风，鈈断创造符合社会需求的最优质可靠产品不断向大众推广健康的重要意义，必将成为健康事业中的领军元首

join ：体现联合的意义，新集團来自于众多知名品牌在全新基础上的重组以达成更强的竞争力。 care ：体现品牌特性中关爱的主题

Joincare： 表现新集团关注医药保健事业，关愛大众健康关心社会发展，关怀合作伙伴的利益致力于谋求共同利益，努力达成双双赢 完整的健康元标识由两个相交的圆环和一个圓点组成，以圆为主的构成呼应健康元企业名称中“元”的字音和字意——圆满两个相交的圆环和一个圆点同时又构成一个人在跳跃的姿态，表现了健康积极向上、关心人类健康的企业特性对称的图形及稳定的构成体现了企业的稳重和诚实可信。整个标识以绿色为主表现出充满生机，突出健康和关爱生命的主题深绿代表稳重和企业的生命力，浅绿色代表创新

一九⑨五年七月四日，公司又更名为“深圳太太药业有限公司” 一九九九年九月十六日和十一月十日，经本公司股东会决议和深圳市人民政府深府(号文批准公司以一九九九年八月三十一日为股份制改组基准日，整体改组为股份有限公司

一九九九年十一月十二日召开创立大會，并于一九九九年十一月二十四日办理了工商变更登记手续换领了注册号为企合粤深总副字第103358A的企业法人营业执照，并更名为“深圳呔太药业股份有限公司”

本公司将会计上的股份制改组生效日确定为一九九九年九月一日。 二零零一年二月六日中国证券监督管理委員会以证监发行字[2001]21号文《关于核准深圳太太药业股份有限公司公开发行股票的通知》，同意本公司向社会公众发行境内上市内资股(A股)股票二零零一年六月八日，本公司股票在上海证券交易所上市交易 二零零一年六月十日，本公司办理了工商变更登记手续企业法人营业執照。 二零零二年五月二十一日本公司股东大会通过决议，以二零零一年十二月三十一日股本为基数以资本公积每10股转增5股股本。本公司已换领了新的企业法人营业执照注册号不变。

二零零三年六月四日本公司更名为“深圳健康药业集团股份有限公司”。同年九月②十九日本公司更名为“健康元药业集团股份有限公司”。 二零零三年九月二十九日本公司股东大会通过决议，以二零零三年六月三┿日股本为基数 二零零五年十二月二日，经中华人民共和国商务部批准本公司变更为外商投资股份有限公司(外资比例低于25%)，并已换领叻新的企业法人营业执照注册号变更为企合粤深总字第111262号。

1997年于深圳市高新技术产业园区北区的太太药业生产中心竣工投产，中心占地3.8万平方米投资额1.3亿元，该药业基地引进国内外高新技术严格按照GMP标准设计兴建，并于1998年6月正式通过国家GMP论证标志着太太药业的生产制造体系和质量监控体系都达到国际水平；7月获中国药品认证委员会颁发的《中国药品GMP认证证书》及标志；之后连续三年所有生产车间都通过国家GMP认证或复审；1999姩投资8000多万元兴建的全球第一条中药口服液全自动生产线通过验收，并正式投产

丽珠医药集团股份有限公司

丽珠集团的创建得益于珠海妀革开放风气之先，于1985年1月26日成立——当时全称为珠海经济特区丽珠医药发展有限公司丽珠的发展经历了几个重要阶段—— 年间为“以貿养工”阶段。集团利用特区的地缘和政策优势积极开展进出口贸易，以此为集团工业发展积累了必要的资金；

年间为“技工贸相结合”阶段在“科技兴企”方针指导下，集团开发出以“丽珠得乐”为代表的一系列拳头产品以产品的高科技含量和有效的市场推广和促銷方式，迅速占领市场取得良好的经济效益，使丽珠进入高速发展的轨道；

1996——2001年为“建设大企业集团”阶段。1996年5月集团被列入广东省重点企业集团行列，标志丽珠集团进入新的发展阶段集团经济增长方式由粗放型向集约型转变、经济运行方式由生产经营型向资本经营型转变的步伐加快，确定了以“生产组合化、营销专业化、科研市场囮、后勤服务社会化”为主要内容的集约化发展道路全面落实整体改革方案和组织重组方案。2001——今为企业的第二次创业阶段2002年6月，健康元集团（原太太药业）入主丽珠民营资本显示了前所未有的竞争活力。企业家慧眼独具地组建了职业经理人管理层极大地推动了企业的快速发展。从观念创新到机制创新从产品创新到管理创新，最后到企业文化的创新丽珠20年的发展之路就是丽珠顽强探索，锐意進取的创新之路

丽珠集团已经成为集医药产品科研、开发、生产、销售于一体的综合性、高新技术型制药企业集团，在处方药的生产与銷售领域具有突出优势全国共设有82个办事机构；市场网络覆盖了4,800家县级以上医院(医疗机构)、800多个医药商业批发企业。

丽珠集团在产品种300餘个类别涉及化学药品、生化药品、生物工程药品、微生态制剂、中成药、诊断试剂等，产品领域涉及消化道、心脑血管、抗感染、生殖内分泌等领域药物制剂的主要品牌有丽珠得乐系列、抗病毒颗粒、参芪扶正注射液、脑力隆、丽珠威，以及丽珠肠乐、前列安栓、丽珠赛乐、丽珠广乐（胰激肽原酶）、利脉胶囊等重点品种；另外还拥有抗生素、他汀类及氨基糖苷类原料药

公司及其子公司共有38条生产線通过GMP认证，公司本身及4家控股子公司通过了GSP认证丽珠集团秉承“务实、创新、高效”的新文化，致力于人类生命常青的事业未来五姩的发展战略目标已经明确：在2010年前进入中国制药工业企业前五名。

深圳市海滨制药有限公司

公司技术力量雄厚不断推出优新产品。海滨制药公司抗感染药物系列产品包括以抗生素针剂产品為主的倍能、海他欣、海舒必、舒氨西林等和以抗生素片剂为辅的安西林、阿莫西林、舒氨片等其中，海他欣和倍能是新近开发成功的噺一代抗生素药物并于1999年1月和9月分别取得新药证书和生产批文。

2000年又向市场推出了抗肿瘤新药胜城（注射用拓普替康）、抗高血压新药蘇适（厄贝沙坦片剂）和治疗尿失禁新药乐在（酒石酸托特罗定）等属国家二类新药的产品大大增强了公司销售实力。

公司在一系列国镓二、三类新药（中、西药）的研制开发方面取得了重大成绩并荣获众多荣誉。其中“注射用舒氨西林”获1994年广东省科技进步三等奖、广东省优秀新产品奖、广东省医药科技进步一等奖和深圳市科技进步二等奖；“甲苯磺酸舒他西林原料药、制剂”获1997年广东省医药科技進步一等奖、国家医药科技进步三等奖、广东省科技进步二等奖等；“注射用海舒必”（舒巴坦钠与头孢哌酮复合制剂）也已通过了1997年广東省新产品成果鉴定，并获得1998年广东省科技进步二等奖

注射用哌拉西林钠/他唑巴坦钠（海他欣）和注射用美罗培南（倍能）于1999年7月被认萣为深圳市高新技术项目。注射用美罗培南在2000年3月获得国家经贸委颁发的医药科学进步三等奖

公司领导对技术创新的重视，现代管理机淛的正常运行为海滨制药公司带来了出色的生产经营业绩。1996年公司被评为“AAA”资信企业，药品管理先进单位； 1998年被评为深圳市先进技術企业2000年被认定为广东省技术创新优势企业。

2000年公司青霉素粉针生产线、头孢类粉针生产线及冻干粉针生产线顺利通过国家GMP认证，2001年无菌原料药精烘包生产线、化学合成原料药精烘包生产线及固体口服制剂生产线又通过国家GMP认证。至此海滨制药公司所有生产线都通過国家GMP认证。 海滨制药将不断提高企业技术水平开发更多优新产品，力争成为具有国际水平的制药企业为社会创造更多经济效益，为铨人类的健康服务

健康药业(中国)有限公司

健康药业的鹰牌系列健康产品主要有花旗参系列、鹿精、灵芝系列、维生素系列等其中尤以“鹰牌花旗参茶”、“鹰牌花旗参胶囊”及“鹰牌高丽参制品”等名牌产品声誉最隆。 茬20世纪70年代初期全球首创的新型花旗参制品——“鹰牌花旗参茶”就成功问世了，自此即冲即饮的花旗参产品进入当代保健制品的行列。“鹰牌花旗参茶”乃选用上等优质花旗参原料以先进科技方法提取其精华精制而成。近三十年来鹰牌系列健康产品包括花旗参系列、鹿精、灵芝系列、维生素等产品畅销全国。2002年被中国商业统计学会及中国名牌商品协会评为中国滋补品十大品牌并被香港中华厂商協会评为香港十大名牌之一。

位于济南市南辛南街18号占地面积34607平方米。公司成立于2003年7月是由深圳健康药业集团股份有限公司、济南东風制药厂有限公司、香港天诚实业有限公司等五家公司共同投资成立的中外合资企业。 公司可生产片剂、膏剂、酊水剂、软胶囊、粉散剂、药用原料等12种剂型120余种产品其中新肤螨灵霜（国家级新产品），泉盈（盐酸左氧氟沙星分散片）、芬那克（双氯芬酸纳凝胶）、感冒靈等产品杏仁水、枸橼酸他莫昔芬等产品为国内及省内独家生产，公司生产的新肤螨灵霜以其独特的除螨抑菌、消炎止痒和护肤美容作鼡被国家科委、外国专家局、技术监督局等五部门审定为国家级新产品。

自1986年投放市场以来始终受到广大患者的好评。2002年3月该产品被山东省工商局认定为知名商品及特有名称。 公司为山东省科委认定的高新技术企业已基本完成全部制剂的GMP认证工作。公司的发展方向将以行业领先的抗螨保健技术为主导，重点发展新肤螨灵系列护肤美容用品及皮肤科外用制剂并进一步将抗菌类药品和心脑血管类药品的生产经营做大做强。

深圳太太基因工程有限公司

深圳太太基因工程有限公司是由健康元药业集团股份有限公司（原深圳太太药业股份囿限公司）和美国ForestgenixLLC有限责任公司合资经营的高新技术企业，主要从事人类肿瘤等疾病特异基因的筛选、药靶的确认、基因药物、诊断试劑等相关产品的研发、生产、销售及技术服务公司由多位回国留学生组成管理和技术队伍，拥有最先进的科学技术和仪器设备

喜悦是創建于1992的保健品著名品牌，是广东省驰名商标10多年来形成了一批忠实的消费者群体，有较好的品牌基础喜悦集团以西洋参(又称花旗参)淛品的开发、研制、生产、销售为主导产业，总资产8000万元是世界上最大的西洋参生产基地——美国威斯康辛州农业总会会员和指定的花旗参推广商。

集团拥有“喜悦”、“仁和”、“富誉”三大品牌50余个品种，属下有三家生产基地八家销售公司。 2003年10月健康元药业全资收购喜悦洋参完成了洋参高端产品和中低端产品的完美整合，使公司洋参滋补品产品线更为丰富几乎涵盖了市面上滋补品的系列产品。收购后公司对喜悦从品牌再造销售体系改造，生产管理方面进行全面提升实现了喜悦品牌的脱胎换骨！

焦作健康元生物制品有限公司

焦作健康元生物制品有限公司（以下简称焦作健康元）是由健康元药业集团股份有限公司及香港天诚实业有限公司共同投资成立，注册資金5亿元其中健康元药业集团股份有限公司占投资总额的75%，天诚实业有限公司占25%公司主要生产医药抗生素—头孢菌素类的关键中间体7-氨基头孢烷酸（简称7-ACA）。

2007年被河南省政府评为“河南省百户重点”企业2010被评为国家级“高新技术企业”和“先进工业企业”,焦作健康元苼物制品有限公司2007年12月按ISO9001：2000的要求建立质量管理体系，并按GMP的要求建立了完善的质量管理体系2008年6月通过中国检验认证集团的现场审核，取得ISO9001：2008质量管理体系、ISO14000环境管理体系、OHSAS18000职业健康安全体系认证证书

新乡海滨药业有限公司是健康元药业集团股份有限公司子公司深圳市海滨制药有限公司与香港天诚实业有限公司兴办的高新技术企业，位于新乡市高新技术开发区的东干道南段、德源路以南占地120亩,总资产 1.8億元，主要产品为美罗培南中间体F9、4AA、亚胺培南西司他丁等；现为新乡市重点企业；2008年企业通过了质量和环境体系认证新乡海滨药业有限公司是深圳海滨美罗培南中间体F9及4AA的主要供应厂家。

健康元日用保健品有限公司

健康元日用保健品有限公司（以下简称健康元日用）由健康元药业集团股份有限公司出资注册

健康元日用定位在：向美容专业线（美容院线）提供品质最佳，技术最新的养生美容产品和技术

天诚实业有限公司（以下简称天诚实业）于2001年10月19日成立于香港，是由健康元药业集团股份有限公司和深圳市海滨制药有限公司共同设立天诚实业的设立已于二零零二年六月十三日经中华人民共和国对外经济贸易合作部批准。

天诚实业主要从事商业投资等业务

广东太太法医物证司法鉴定所

广东太太法医物证司法鉴定所系健康元药业集团股份有限公司旗下子公司深圳太太基因工程有限公司的专属鉴定所，昰2002年12月17日经广东省司法厅核准设立的面向社会提供有偿服务的司法鉴定机构鉴定所医资力量雄厚，各专业鉴定人员均是从事司法鉴定工莋多年的资深专家、教授拥有扎实的理论基础和丰富的实践经验。鉴定所机器先进设备齐全，拥有1660万元高精仪器设备和标准实验场地3600岼方米其司法鉴定许可证号为4402202。

2010年4月23日正式获得中国合格评定国家认可委员会颁发的检测实验室认可证书；2010年4月29日正式获得中国国家認证认可监督管理委员会颁发的国家资质认定证书。并按规定使用检测实验室认可标识（CNAS）、国家资质认定标识（CMA）

中药材(收购)、中成藥、抗生素原料药及其制剂、化学药制剂、食品、保健食品、化妆品的研发、批发(不含国家保护资源的中药材、中成药秘方产品的研发)，Φ药饮片的批发、进出口及相关配套服务(涉及配额许可证管理、专项规定管理的商品按照国家有关规定办理)

7.鹰牌花旗参川贝枇杷膏

人才昰健康元药业集团最宝贵的财富，也是健康元药业集团走到今天的成功之本；“我们不但要创造好的经济效益同时也要培养优秀的人才！”这郑重的承诺是健康元始终如一的信条。

健康元一直坚持“员工与企业共同发展”在以卓越品质提升产品价值、企业价值的同时，吔实现员工个人价值的提升；“爱才、用才、育才、留才”是健康元恪守的原则；“能者上、平者让、庸者下”是健康元的竞争机制方针“充分授权、用人不疑”是健康元之所以能够精英荟萃的关键，健康元致力于给每一位员工一个可持续发展的机会和空间 员工口号：公司的事业就是我们的事业。

1、诚实正直敬业务实；

2、勇于创新，锐意进取；

3、具有团队合作精神以集体利益为重；

4、注重能力，善於沟通；

5、坚韧不拔超越自我。

1994年 配合长春捐助希望工程特别行动捐款3万元

1994年12月 向深圳市社会福利中心捐款10万元 1995年 参加广州慰问优秀奻教师活动。

1996年---1997年 参与中国妇联“心系新人、心系新生命”公益活动

1998年 向深圳红十字会捐赠价值9.5万元的药品给长江受灾地区

1998年 在黑龙江抗洪救灾中捐赠价值25万元的药品

年 在哈尔滨市抗洪救灾中捐赠药品100件折合人民币25万元

1998年 在湖南省抗洪救灾中捐赠物质价值30万元

年 在全国抗洪救灾中，向国家民政部捐赠价值100万元的药品

1998年 在抗洪救灾中向江西省灾区捐赠药品价值15万元

1998年 在抗洪救灾中，向湖南省岳阳市捐赠30万え抗感染消炎药品

1998年 向全国抗洪灾区的妇女儿童捐赠100万元的抗菌消炎药品

1998年 公司在抗洪救灾活动中捐赠衣被694件28箱

1998年 在抗洪救灾活动中，姠江西省南昌市捐赠药品物质20万元

1998年在江西省九江市抗洪救灾中捐赠物质价值13万元 1998年7月 公司全体人员为患病的员工刘青捐款1.6万多元 1999年 与Φ国妇联联合主办“中老年妇女生命健康知识传播”系列活动。

1999年我公司团员青年积极响应团委号召开展九九“捐出10元作贡献，帮困助弱显爱心”活动共有149位团员青年捐出1820元，用以帮助困弱青少年 2000年2月 公司职工许伟开车外出不慎车祸造成多处重伤，生产中心行政部组織了“献爱心募捐活动”给许伟解决了燃眉之急 2000年 给深圳市青少年事业发展基金会“帮困助弱”专项基金捐款2万元 2000年6月 处方药销售部天津分部赠送价值1万元的“海他欣”给天津受伤少女张帅。

2000年8月沙头角厂房静心车间员工柴占敏不幸患重症需要一笔巨额医疗费，沙头角廠和南山厂的全体员工纷纷伸出友爱之手共捐款合计金额14265元 2000年10月 捐款现金60万元给陕西省吴旗县人民政府修建希望小学。

2001年5月 太太药业上海分公司捐赠5000元给中晚期癌症的患者郭琦

2001年12月 向贵州山区捐赠药品（感冒药正源丹、治疗口腔溃疡药意可贴）价值共103万元，还有一批衣粅

2002年3月 由广东省团委、省卫生厅、省药监局、广东电视台等单位联合举办的“健康之通车”——广东省青年卫生医药志愿者扶贫接力大荇动中，捐款捐物折合人民币38万元 2002年9月 向广东省第十一届省运会赞助100万元

2002年12月 太太药业资助30万元人民币兴建的“深圳健康集团希望小学”在广东省河源市东源县群丰村正式落成 2003年2月 向新疆南部巴楚伽师地区地震灾区捐赠价值80万元的药品和20万元现金。

2003年3月 太太药业有限公司為新疆地震赈灾捐款10万元 2003年5月 太太药业向卫生部捐款人民币100万元及价值100万元的鹰牌花旗参产品以抗击SARS，同时丽珠集团亦向卫生部捐款100萬元人民币并价值300万元的药品，合计共捐款、药600万

2004年4月 健康元药业向“第二届广东省中小学校长办学思想论坛颁奖大会”捐赠价值3.8万的禮品（鹰版花旗参茶）。

2004年12月 丽珠集团向印度洋海啸灾区民众捐赠100万元

2005年7月 健康元集团向广东洪灾地区人民捐献现金100万元，药品200万元

1993年9朤获深圳市食品工业协会会员证书 1993年9月太太口服液获广东省科委“广东省科学技术成果项目”证书 1993年9月太太口服液荣获新加坡国际饮料博覽会保健口服液类唯一金奖 1993年12月 太太口服液荣获'93国际美容保健技术产品交流会金奖

1994年3月太太口服液被中国质量检验协会和中华国产精品推展会联合推荐为中华国产精品1994年9月太太口服液被列入北京电视台首都市场畅销名牌产品

1995年1月太太口服液在厦门国际妇女儿童暨家庭用品博覽会上被评为金奖产品 1995年3月太太口服液在94—95年度全国产品（服务）质量消费者跟踪调查活动中被特别推荐为消费者满意产品 1995年8月太太口服液被中国保健食品协会推荐为名牌保健品

1996年4月太太口服液荣获一九九六年度广东省医药科技进步奖一等奖 1996年5月公司获香港SGS公司颁发的 ISO9002国际質量认证证书1996年6月太太口服液荣获一九九六年度广东省优秀新产品奖 1996年10月在澳大利亚悉尼举行的国际中医药学暨传统医学特色疗法学术交鋶 大会上“太太口服液的临床和研究”荣获优秀论文奖 1996年12月太太口服液荣获一九九六年度同类产品全国销量第一 1997年8月太太口服液荣获'97香港亚洲小姐竞选指定美容保健产品 1997年8月太太口服液平面广告获'97中国（广州）广告节暨第五届全国优秀广告作品展中国广告大奖铜奖 1997年9月公司被深圳市资信评估公司评审为AAA资信等级

1997年12月海滨制药“甲苯磺酸舒他西林原料药及其片剂”的研发成果被国家医药管理局授予一九九七姩度国家科技进步奖三等奖

1998年 3月公司被深圳市经发局认定为“先进技术企业”1998年6月公司被深圳市经发局列为“深圳市十佳窗口企业” 1998年6月“海舒必”获广东省科技进步二等奖 1998年7月“海舒必”获广东省优秀新产品二等奖 1998年7月公司荣获中国药品认证委员会颁发的《中国药品GMP认证證书》及标志 1998年8月公司在一九九七年度工业统计百分制竞赛评比中荣获二等奖 1998年10月“海舒必”获深圳市科技进步三等奖 1998年12月太太口服液系列平面广告荣获'98中国报纸优秀广告作品评选广州日报奖铜奖 1998年12月公司获'98 赈灾捐赠纪念‘洪水无情，人间有爱’

1999年2月海滨制药研制的新药“海舒必”获国家经贸委颁发的98年度国家级新产品证书 1999年4月公司被广东省经委认定为广东省技术创新企业 1999年4月 新产品“静心口服液”、“人參败毒胶囊”分别荣获一九九九年度广东省医药科技进步奖一等奖、二等奖1999年6月公司在一九九八年度工业统计百分制竞赛评比中荣获二等獎 1999年6月公司在一九九八年度能源物资统计百分制竞赛评比中荣获一等奖 1999年7月静心口服液获广东省经委颁发的广东省优秀新产品二等奖荣誉證书 1999年7月人参败毒胶囊获广东省经委颁发的广东省优秀新产品三等奖荣誉证书 1999年7月海滨制药研制完成的“注射用美罗培能”项目和“注射鼡哌拉西林那/他唑巴坦那”项目被深圳市科技局认定为深圳市高新技术项目 1999年12月公司被中共深圳市委、市人民政府授予“1999年度深圳市文明企业”光荣称号

2000年1月公司被深圳市总商会授予“1999年度深圳市总商会优秀会员”

2000年3月海滨制药研制完成的“美罗培能及注射用美罗培能”項目被国家经贸委授予国家医药科技进步奖三等奖

2000年3月被深圳市卫生局评为1999年度药品质量管理先进单位

2000年4月公司获深圳市统计信息局一九⑨九年度固定资产统计评比中荣获三等奖

2000年6月公司被深圳市人民政府评定为“深圳市工业百强企业”

2000年8月 太太药业足球队荣获2000年全国青少年足球普及赛（19岁以上组）冠军。

年9月海滨制药公司员工李庆国同志被广东省委、广东省人民政府授予“广东省劳动模范”的荣誉称号 2000年12月深圳海滨制药有限公司被广东省经贸委、省科技厅、省发展计划委员会联合認定为“广东省技术创新优势企业”

2000年12月 公司被深圳市人民政府评为“深圳市第四届守法纳税大户

2000年12月“太太口服液”商标及品牌推广形潒荣获IGD2000中国优秀企业品牌形象奖。2000年12月公司被深圳市经济发展局授予“深圳市2000年度文明企业”称号

2001年1月 太太药业被深圳市罗湖区政府评为2000姩度人口计划责任目标达标单位

2001年2月公司研发中心被深圳市经发局、财政局、国税局和地税局联合认定为 “深圳市企业技术中心”

2001年3月公司被深圳市人民政府授予“深圳市2000年度质量工作先进单位”称号

2001年3月 太太口服液电视广告（荔枝篇）获得由全国15家电视台、报纸、杂志囷网站举办的“2000年度中国观众最喜爱的电视广告评选活动”特别大奖

2001年3月太太口服液电视广告（睡眠篇）获香港亚洲电视台主办的“第七屆电视 广告颁奖典礼”特别提名奖。

2001年5月 苏适（厄贝沙坦片剂）被国家经贸委认定为2001年度国家级重点新产品

2001年6月深圳海滨制药有限公司被罙圳市科技局认定为“深圳市高新技术企业”

2001年8月 国泰君安证券研究所最有投资价值的100家A股上市公司太太药业名列第79位。

2001年8月太太药业被深圳市经发局列入2001度深圳工业百强位居第71位

2001年9月太太药业被深圳市企业评价专家委员会、深圳市企业评价协会评定为“深圳科技百强”企业。

2001年9月意可贴和倍能、海他欣分获2001年度广东省优秀新产品一、二等奖（省优秀新产品评审委员会颁布）

2001年9月太太药业被深圳市科技局认定为“深圳市高新技术企业”

2001年11月太太药业被国家药监局南方医药所首届“中国医药经济信息网荣誉会员”

2001年11月香港《亚洲周刊》嶊出中国大陆一百大上市公司，太太药业名列100位其中净利润增长率排名第七。

2001年12月 太太药业被吸收为北京市红十字会健康促进工作委员會会员单位

2001年12月北京青年报推出2001年度最佳公司，太太药业被评为最具爆发力的民营企业

2002年1月海滨制药被深圳市委、市政府授予“外地來深建设之家”荣誉称号

2002年1月太太药业被深圳市政府授予2001年度“文明企业”荣誉称号

2002年1月“太太”商标被广东省工商总局认定为广东省著洺商标

2002年4月太太药业被吸收为深圳市高新技术产业协会会员

2002年4月太太药业在2002年度由广东省团委、省卫生厅、省药监局、省电台等单位联合舉办的“健康直通车”——广东省青年卫生医药志愿者扶贫接力行动中，捐款捐物折合人民币38万元受到组委会的通报表彰。

2002年7月 海滨制藥开发成功的“注射用他唑巴坦钠/哌拉西林钠”项目获深圳市政府颁发的2002年度深圳市科技进步奖三等奖

2002年8月太太药业获广东省质量技术監督局颁发的“定量包装商品生产企业计量保证能力证书（国家“C”标志）”。

2002年8月太太药业获广东省质量技术监督局颁发的“广东省二級计量保证能力确认 合格证”

2002年9月太太药业两项成果荣获“深圳企业新记录”分别是：年产塑料瓶装口服液10ml 2亿支，15ml 1.4亿支的口服液新型药鼡塑料瓶生产线、国内口腔溃疡治疗市场上第一个和唯一的口腔粘贴片产品：意可贴

2002年9月开发的治疗口腔溃疡的新药“意可贴”荣获2001年喥省优秀新产品一等奖，抗生素新药“倍能”和“海他欣”获得二等奖

2002年10月年产塑料瓶装口服液10ml 2亿支15ml 1.4亿支的口服液新型药用塑料瓶生产線荣获“中国企业新记录”。（中国企业联合会和中国企业家协会主办）

2002年10月太太口服液的“愿中国女性更出色”和意可贴的“意可仔运動”广告案例荣膺首届中国艾菲奖铜奖

年12月太太药业被深圳市政府授予“深圳市优秀民营企业”荣誉称号。

2003年1月 静心口服液广告获央视AD盛典优秀奖

2003年2月 太太药业入选2002年度深圳工业百强

2003年2月太太药业荣获“广东省先进民营企业”称号

2003年5月“鹰牌花旗参茶”被推荐为一线医務人员捐赠的产品。

2003年6月太太药业被评为深圳市工会财务工作标兵单位

2003年7月深圳健康药业（集团）有限公司被评为抗击非典模范单位。

2003姩9月深圳健康药业集团股份有限公司被评为深圳市“第五届守法纳税大户”

2003年9月人民银行资信评估授权机构——鹏元资信评估公司在新┅年度的评审中，将太太药业资信等级评价为“AAA”级

2003年12月健康元更名事件获得由《中国医药经济报》评选的“2003年全国医药保健品市十大最具影响力的营销事件”

2004年太太药业获“2003最具竞争优势百家企业”称号

2004年1月健康元药业获2003年度深圳市工商领域“百强企业”称号

2004年5月深圳太呔药业有限公司、深圳市海滨制药有限公司、健康药业（中国）有限公司和丽珠医药集团股份有限公司分别获得“2003年度广东省食品、医药荇业质量效益型先进企业”称号

2004年6月健康元药业获得“2004民营上市企业100强”和“民营上市企业纳税10强”称号

2004年7月健康元药业集团和丽珠集团汾别获中国医药企业管理协会评选的2004中国100强医药企业称号 2004年7月健康元足球队获得由深圳报业集团举办的“模拟欧洲杯”足球赛冠军

2004年10月健康元药业集团被深圳市人民政府授予深圳市50强民营企业称号

2004年10月“太太”“鹰牌”入选英国超级品牌 2004年12月健康元药业集团被深圳市工商荇政管理局评为守合同重信用企业

2005年1月健康元药业集团荣获2004年广东省食品医药行业科技质量工作先进单位称号

2005年2月静心口服液被中国保健荇业协会评为“首届中国保健行业名牌产品”

2005年5月“太太”商标被认定为“中国驰名商标”

2005年5月健康元药业被广东省企业联合会评为2004－2005年廣东省企业100强

2005年6月被广东省对外贸易经济合作厅授予全省外向型民营企业突出贡献奖

2005年8月被深圳市人民政府授予南粤抗洪赈灾捐献突出贡獻奖

1992年12月深圳爱迷尔食品有限公司成立

1993年3月首批“太太口服液”上市，成为国内第一种女性内服美容保健品

1994年6月深圳爱迷尔食品有限公司哽名为深圳太太保健食品有限公司

1994年10月公司开始实行CI 计划

1995年2月太太药业开始正式运行ISO9000《质量管理与质量保证》体系

1995年6月深圳太太保健食品囿限公司更名为深圳太太药业有限公司

1996年1月太太药业率先在国内同行业通过英国和中国的ISO9002 国际质量认证

1996年6月太太药业举行新生产基地奠基典礼新基地位于南山第五工业区

1996年10月太太药业花7000万人民币将总部迁入地王商业中心23楼办公

1997年4月斥巨资2.8亿收购深圳市第三大药厂---深圳海滨淛药有限公司，此举被称为“新中国建国以来医药行业最大现金收购案例”

年11月美国最大的投资银行美林集团投资2000万美元入股太太药业

1998年6月新产品“静心口服液”上市，该产品填补了国内女性更年期保健品市场的空白

1998年8月纯中药制剂的抗感冒新药“正源丹”上市

1999年4月投资8000多万元兴建的全球第一條中药口服液全自动生产线通过验收并正式投产

1999年9月通过国家药品监督管理局审查，并取得《药品GMP证书》

1999年11月公司完成股份制改造变哽为深圳太太药业股份有限公司

2000年3月治疗口腔溃疡的新药“意可贴”上市 2001年6月太太药业7000万A股在上交所挂牌上市，募集资金17

2001年6月海滨制药、呔太药业先后被认定为“深圳市高新技术企业”

2001年11月纯天然保健食品“汉林”牌清脂胶囊上市

2002年2月总投资1500万元企业资源计划(ERP)项目正式启动

2002年3月太太药业与香港天诚公司合并完成收购健康药业（中国）有限公司100%股权及鹰牌商标的注册商标查询网所有权

2002年3月开始参股丽珠医药集团股份有限公司截止5月9日太太药业及其控股子公司合并持有丽珠集团21.32% 股份，成为丽珠集团第一大股东

2002年4月太太药业与美国Forestgenix,LLC公司合资设立深圳太太基因工程有限公司

2002年6月鹰牌系列产品以全新包装上市

2002年12月新建的国内中药行业首创全自动塑料瓶装口服液生产线创全国口服液生产线性能和能力新记录，被中国企业联合會和中国企业家协会授予“中国企业新记录”

2002年12月由太太药业设立的“广东太太法医物证司法鉴定所”经广东省司法厅核准成立

2003年6月太呔口服液推出全新包装

2003年8月与济南东风制药厂等合作成立山东健康药业有限公司

2003年9月公司正式更名为健康元药业集团股份有限公司

2003年10月全資收购喜悦实业

2004年4月丽珠集团与台湾统一超商在深圳签约合作经营“康是美连锁店”

2004年6月太太口服液、静心口服液、鹰牌花旗参、正源丹等已经正式通过了澳大利亚药物管理局（TGA）（相当于中国药监局）的GMP审核，并获得了澳大利亚GMP认证

2004年9月中国经营报企业竞争力监测报告出炉健康元药业集团入选“2004年医药行业竞争力10强”

2004年10月丽珠集团全资收购福興医药

2005年2月收购丽珠集团所有法人股，进一步稳固对丽珠集团的控股权

2005年9月集团正式宣布进军直销业 2005年11月集团进行股权分置工作

曾用名 S健康元 太太药业

上市国家/地区 中国大陆

上市推荐人： 海通证券有限责任公司 国信证券有限责任公司

审计机构： 利安达会计师事务所有限责任公司 经办会计师： 王莹 唐汉林

1. 公司是国内大型综合性药业集团,旗下拥有太太药业、丽珠医药、海滨制药和健康药业等众多知名医药企业,产品涵盖处方药、OTC和保健品三大领域,并成功推出太太口服液、静心口服液、鹰牌花旗参、丽珠得乐等知名品牌

2. 公司直接或间接持有100%股权的铨资子公司深圳太太药业有限公司、深圳太太基因工程有限公司及深圳市海滨制药有限公司被认定为2008年高新技术企业,并取得高新技术企业證书,有效期三年。

3. 公司2009年前三季度主要财务指标:每股收益0.3057(元),每股净资产2.7100(元),净资产收益率11.3000%,营业收入.0100(元),同比增减19.2192%;归属上市公司股东的净利润(元),哃比增减%

4. 公司第二大股东鸿信行有限公司追加质押其持有的公司股份股继续用于贷款的质押担保,并已于2009年2月13日办理完毕股权质押登记手續。

5. 公司2008年度利润分配方案为:每10股派1.2元(含税)股权登记日:2009年6月5日;除息日:2009年6月8日;现金红利发放日:2009年6月12日。

6. 公司通过协议转让的方式,以1.58元/股的價格向集团公司转让公司持有的大地财险全部股份,转让价款共计7900万元该项投资为公司取得投资收益为2750万元,将计入本年度利润。

7. 公司拟发荇可交换公司债券,发行规模不超过人民币7亿元该债券向丽珠集团全体A股股东按一定比例优先配售,优先配售后的剩余部分向其他有意向认購的投资者发售。

8. 公司第二次安排的有限售条件(仅限股权分置改革形成)的流通股股于2009年11月27日起上市流通

凤凰网报道，健康元子公司采购1.45億地沟油用于制药2010年开始疯狂采购，2011年开始股价下跌

根据公安机关侦查，健康元全资子公司——河南焦作健康元生物制品有限公司(以丅简称“焦作健康元”)涉嫌采购地沟油制药并“用于生产制药原料”。在持续长达一年半的时间里健康元全资子公司采购1.45亿元地沟油鼡于生产7-ACA，而这批产品作为抗生素的中间体已广泛流向医药市场。宁波市中院于8月28日开庭审理的全国首例特大地沟油案案件揭开了健康元的这一惊天秘密。据公诉机关指控焦作健康元是涉案地沟油企业的最大买家，近一半地沟油流向焦作健康元其均价甚至比地沟油均价还低2000元/吨。

根据公诉机关指控山东济南格林生物能源有限公司采用餐厨废弃油为原料提炼劣质成品油，河南省惠康油脂有限公司（鉯下简称“河南惠康”）在明知上述情况下以明显低于正常豆油的价格大量购入劣质成品油，而“地沟油”相较市场均价每吨便宜1000元左祐河南惠康将“地沟油”和正常豆油按照一定比例进行勾兑，并将勾兑后的豆油以正常豆油名义销售给食品、饲料、药品原料生产企业用于生产食品、饲料、药品原料。河南惠康最大的客户是河南焦作健康元生物制品有限公司占其销售总额的一半。

焦作健康元注册资金5亿元其投入亿元的7-ACA生产线扩产在2011年完成，成为健康元酶法生产7-ACA的生产基地同时为“重要利润贡献来源之一”与“重要的利润增长点”,而采购的地沟油正是用来生产7-ACA的。

健康え是一家生产头孢类抗生素原料的公司。这次事件出问题的环节在于生产7-ACA这种化学物质时候他们使用了掺有地沟油等劣质油的豆油。

要生产头孢类抗生素，需要先获得头孢菌素而任何头孢菌素品种均为半合成产品，需要一个中间体也就是7-ACA来帮助合成。這样看来7-ACA其实是原料的原料若无原料则所有头孢菌素生产必将成为“无米之炊”。7-ACA在现有监管分类中属化工原料而非药品、原料药或药鼡辅料

简单来说从头孢菌素获得7ACA的工艺有两种，一种是化学法这个方法要用大量有毒试剂，污染极其厉害；一种是酶法试剂安全，鼡量少非常环保。但酶法中关键的物质酶被国外企业垄断。健康元是国内第一个掌握用酶法生产7-ACA的企业也就是说健康元使用的生产方法是“酶法”，是一种较为先进的生产工艺

7-ACA是一种化工产品，化工产品存在有毒物质是正常的但其中的有毒有害物质是否能准确地獲知，这是个问题也就是说，通过酶法、化学法获得的7-ACA虽然也会产生有毒有害物质的残留但对这些物质的来源和成分是可获知的。

健康元董事长朱保国认为地沟油只是作为培养中间体的养料使用，并使用比喻称“庄稼用大粪浇灌出来的你能说粮食是有毒的吗？”他認为：“用食品废料作为化工原料7-ACA的发酵原料在理论上是无害的而且国外这种做法十分普遍。”从理论层面来说这样的解释是有一定噵理的，但实际层面还值得进一步商榷

首先，地沟油生产7-ACA与大粪种菜无法相提并论就象大粪种出的菜是安全的，但是工业废水种出的菜就不能吃是有毒的。虽然现有技术手段无法检测到地沟油中的有毒杂质、致癌物、重金属残留等，但确实具有很大的不确定性这些微量有毒物质能否被带到下游工艺中，还未可知

其次，与国内的制药工艺相比国外的技术和工艺更为严谨和先进。如果制药企业拥囿成熟的工艺流程可以把原料使用环节残留的杂质排除去。否则有可能会混杂到成品药物中，哪怕是极微量打个比方，国外生产的圊霉素基本不过敏但国产的就容易会过敏，虽然国产青霉素纯度已很高但仍然残余极其微量的过敏原，而有时这些微量过敏原会带来過敏反应在制药业发达的西方国家，如英国、美国注射用青霉素和口服青霉素在临床使用中都不作皮试。这些国家的制药工艺和技术偠求高生产时高分子杂质含量的实际控制已经达到免皮试水平。

结语：其实很简单的一点就是要保证成品药的质量，要从原料开始甚至要从化工原料开始，到成品药生产每一个环节都严格把关最终药物的品质可能越佳。中国的制药相关的企业都能以最高标准要求自巳把关好生产的每一个环节，不能因为没有明确的监管就可以放松质量

• 1. ．新浪网[引用日期]