血清蛋白电泳_英文_拼音_医学百科
血清蛋白电泳
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目录1 拼音xuè qīng dàn bái diàn yǒng2 英文参考serum protein electrophoresis SPE SPEP3 概述等生物在中带负电荷或正电荷，在中向阳极或阴极运动，称为（electmphomsis）。由于其等电点不同，分子、和荷质比的不同，使不同蛋白质分子具有不同的电泳率，在一定的支持介质中可借以各种蛋白质。常用的电泳技术有：薄膜电泳、糖电泳、、电泳等。血清蛋白电泳以醋酸纤维素薄膜应用最为普遍。
4 别名5 血清蛋白电泳的医学检查5.1 检查名称血清蛋白电泳5.2 分类 & 蛋白质测定5.3 取材血液
5.4 血清蛋白电泳的测定原理中各种蛋白质都有其特有的等电点，各种蛋白质在各自的等电点时呈电中态，它的分子所带正电荷与所带负电荷量相等。将蛋白质置于pH比值等电点较高的缓冲液中，它们将形成带负电荷的质点，在电场中均向正极泳动。由于血清蛋白质的等电点不同，带电荷的量多少差异，蛋白质分子量大小也不同，所以在同一电场中泳动速度也不同。蛋白质分子越小带电越多，移动速度越快；分子越大而带电越少，移动速度越慢。按其泳动速度可以分出以下的主要区带，从正极端起，依次为、α1和α2球蛋白，β球蛋白和5条区带。5.5 试剂（1）-巴比妥钠缓冲液（pH8.6±0.1、μ＝0.06）：以巴比妥2.21g、巴比妥钠12.36g于500ml中，加热，待冷却至室温后加蒸馏水至1000ml。
（2）染色液：
①丽春红S染色液：丽春红9.04g、三氯6g，用蒸馏水溶解，并稀释至100ml。
②黑10B染色液：氨基黑10B 0.1g，溶于无水20ml中，加5ml0.5ml使溶解。将磺2.5 g，溶于少量蒸馏水中，加入前液，再以蒸馏水补足至100ml。
①30ml/L醋酸：用于丽春红染色的漂洗。
②45ml，冰醋酸5ml和蒸馏水50ml混匀。用于氨基黑10B染色的漂洗。
（4）透明液：酸（C6H53O7·2H2O）21g和基-烷酮150g，用蒸馏水溶解，并稀释到500ml。亦可选用氢萘或透明。
（5）0.4mol/L溶液或0.1mol/L氢氧化钠溶液。5.6 操作方法（1）将缓冲液加入电泳槽内，调节两侧槽内的缓冲液，使其处于同一平面。
（2）醋酸纤维素薄膜的准备：取醋酸纤维素薄膜（2cm×8cm）在毛面的一端（负极侧）1.5cm处用铅笔轻划一横线，做点样标记。编号，并标明正、负极后，将薄膜置于巴比妥-巴比妥钠缓冲液中，待充分浸透后（一般为20min）取出，夹于洁净滤纸中间吸去多余的缓冲液。
（3）将醋酸纤维素薄膜毛面向上贴于电泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取无血清3～5μl于横线处沿横线加样，应与薄膜的边缘一定的距离，以免电泳图谱中的蛋白区带，待血清渗入薄膜后，反转薄膜，使光面朝上，平直地贴于电泳槽支架上，用双层滤纸或四层纱布将薄膜的两端与缓冲液连通，稍待片刻。
（4）接通电源，醋酸纤维素薄膜上的正、负极，切勿接错。电压90～150v，电流0.4～0.6mA/cm（不同的电泳仪所需电压，电流可能不同，应灵活掌握），夏季通电45min，冬季通电时间稍长，约为60min，电泳区带展开约25～35mm即可。
（5）染色：通电完毕，取下薄膜直接浸于丽春红S染液或氨基黑10B染色液中，染色5～10min（以白蛋白区带染透为止），然后在漂洗液中漂去剩余，直至背景无色为止。
（6）定量：
①：将漂洗的薄膜吸干，剪下各染色的蛋白区带入相应的试管中，在白蛋白管中加0.4mol/L氢氧化钠6ml（计算时吸光度乘以2），其余各管加3ml，振摇数次，置37℃水箱20min使其浸出。氨基黑10B染色用分光光度计在620nm处读取各管吸光度，然后计算出各管的含量（同时做空白管对照）。
丽春红S染色时浸出液用0.1mol/L氢氧化钠，加入量同上法。10min后，白蛋白管内加400ml/L醋酸0.6ml（计算吸光度时乘以2），其余各管加0.3ml，以中和部分氢氧化钠，使色泽加深，必要时离心，取上用分光光度计在520nm处读取各管的吸光度（同时作空白对照），然后计算各自的含量。
②光密度计扫描法：A.透明：吸去薄膜上的漂洗液（为防止透明液被稀释影响透明结果），将薄膜浸入透明液中2～3min，然后取出，以滚动的方式平贴于洁净无划痕的载物片上（切勿产泡），将此玻片竖立片刻，除去多余透明液后，置于恒温90℃至100℃的烘箱内，烘烤10～15min，取出冷却至室温，用此法透明的各蛋白区带鲜明，薄膜平整，可供直接扫描和永久（用氢萘或液体石蜡透明，应将漂洗过的薄膜烘干后进行透明，此法透明的薄膜不能存久，且易皱折）。B.扫描定量：将已透明的薄膜放入全自动光密度计或其他光密度计暗箱内，进行扫描。5.7 正常值醋酸纤维素膜：白蛋白0.61～0.71（61%～71%）、α1球蛋白0.03～0.04（3%～4%），α2球蛋白0.06～0.10（6%～10%），β球蛋白0.07～0.11（7%～11%），γ球蛋白0.09～0.18（9%～18%）。5.8 化验结果临床意义（1）白蛋白减少：见于慢性肝炎、、等。
（2）α1球蛋白（糖蛋白）增高：见于。在重型肝炎、肝硬化、时则减少，与白蛋白呈正。时测定α1球蛋白对肝炎的严重程度和预后有参考价值。一般情况下，α1球蛋白增加示病情较轻，α1球蛋白减少则提示病情较重，在严重肝衰竭时，其血清含量可显著降低。
（3）α2球蛋白：初期无明显变化，后逐渐增加，亚急性肝炎和急性肝、失代偿期肝硬化则减少。
（4）β球蛋白增高：见于、、、合并高血症、梗阻性、。在淤积性肝病时其含量升高，与α2球蛋白升高相平行。降低于见于急、慢性肝炎，肝硬化，尤以失代偿期肝硬化和坏死肝硬化下降最为显著。
（5）γ球蛋白增高：见于慢性肝炎、肝硬化、肝胆疾患。典型肝硬化尚可见β和γ带相融合，形成β-γ桥。肝病γ球蛋白的变化可反映病情的严重程度。随病情好转，其含量可逐渐降至正常，如一直在高水平持续不降，提示病情严重，预后不良，并有向慢性肝炎及肝硬化发展的趋势。此外，、、、等也可升高。降低见于缺乏症、部分化疗患者等。
另外，多发性骨髓瘤在β球蛋白区带与γ球蛋白区带之间常出现M球蛋白带；双白蛋白血症可见双条白蛋白区带。
5.9 附注（1）每次电泳时应交换电极，可使两侧电泳槽内缓冲液的正、负相换，从而使缓冲液保持在一定的pH水平，然而，每次电泳时薄膜数量不同，故缓冲液在使用10次后，最好弃去，重新配制，否则影响电泳效果。
（2）电泳槽内缓冲液高度保持一定，过低会出γ球蛋白的电渗现象（向阴极移动）。同时，电泳槽两侧液面应保持水平一致，否则通过薄膜时有虹吸现象，将会影响蛋白质分子的泳动速度。
（3）电泳失败的原因：
①电泳图谱不整齐：常见于点样不均匀，位置不佳，薄膜尚未或，缓冲液变质，电泳时薄膜位置放置不正确，使电流方向不平行等。
②蛋白组分分离不佳：如点样过多，电流过低，薄膜过分细致，透水性差，导电差等。
③白蛋白结果偏低：见于染色时间不足，染色液陈旧，不透明直接扫描等。
④薄膜透明不完全：见于温度未达到90℃以上将放入烘箱，透明液时间过长或薄膜的浸泡时间不足等。
⑤透明膜上有气泡：见于玻璃片不干净（、污垢等）使薄膜部分与其脱开，贴膜时操作不慎将气泡裹入等。
（4）点加时，一定要注意薄膜的毛面和光面，将样本点在毛面上。
（5）放置薄膜时，要注意其正、负极，切勿接错。5.10 相关疾病肝硬化、原发性肝癌、、脂肪肝、高脂血症、肾病综合征、糖尿病、黄疸、多发性骨髓瘤相关文献
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＞＞＞下列蛋白质的混合物在什么pH时电泳，分离效果最好？(1)血清清蛋白..
下列蛋白质的混合物在什么pH时电泳，分离效果最好？(1)血清清蛋白(pI=4.9)和血红蛋白(pI=6.8)；(2)肌红蛋白(pI=7.0)和胰凝乳蛋白酶原(pI=9.5)；(3)卵清蛋白(pI=4.6)、血清清蛋白(pI=4.9)和脲酶(pI=5.0)。
题型：问答题难度：偏难来源：同步题
(1)血清清蛋白的pI=4.9，血红蛋白的pI=6.8，两者的平均值为5.85，即(4.9+6.8)/2=5.85。因此，在pH5.85时将样品点在中间电泳，分离效果最好。此时血清清蛋白向阳极移动，而血红蛋白向阴极移动。(2)肌红蛋白的pI=7.0，胰凝乳蛋白酶原的pI=9.5，两者的平均值为8.25，即(7.0+9.5)/2=8.25。因此，在pH8.25时将样品点在中间电泳，分离效果最好。此时肌红蛋白向阳极移动，而胰凝乳蛋白酶原向阴极移动。(3)卵清蛋白的pI=4.6，血清清蛋白的pI=4.9，脲酶的pI=5.0。在pH4.9时将样品点在中间电泳，分离效果最好。此时血清清蛋白留在原点，卵清蛋白向阳极移动，而脲酶向阴极移动。
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血红蛋白的提取和分离
血红蛋白的提取和分离：1、实验原理蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。（1）凝胶色谱法（分配色谱法）：①原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。②凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。③分离过程：混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。④作用： 分离蛋白质，测定生物大分子分子量，蛋白质的脱盐等。（2）缓冲溶液①原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3—NaHCO3， NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。②缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。(3）凝胶电泳法：①原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。②分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。③分离过程：在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质—SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。2、实验步骤 （1）样品处理① 红细胞的洗涤洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，采集的血样要及时采用低速短时间离心分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆，将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯，再加入五倍体积的生理盐水，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。②血红蛋白的释放&&在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。注：加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。加入甲苯的目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和分离。（2）粗分离①分离血红蛋白溶液将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。第一层为无色透明的甲苯层，第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层，第3层是红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去之溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。②透析取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液中，透析12h。透析可以去除样品中分子量较小的杂质，或用于更换样品的缓冲液。（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质（4）纯度鉴定——SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳知识点拨：注意事项（1）电泳技术电泳技术就是在电场的作用下，利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。（2）红细胞的洗涤如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。（3）如何检测凝胶色谱柱的装填是否成功由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。 此外，还可以加入大分子的有色物质，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。（4）为什么凝胶的装填要紧密、均匀？如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果。（5）沸水浴处理加入洗脱液的湿凝胶的目的不但节约时间，还能除去凝胶中可能带有的微生物和排除凝胶内的空气。（6）G-75“G”代表凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围，75表示凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5g。（7）装填完后，立即用洗脱液洗脱的目的：使凝胶装填紧密（8）加入柠檬酸钠有何目的？为什么要低速、短时离心？为什么要缓慢搅拌？防止血液凝固；防止白细胞沉淀；防止红细胞破裂释放出血红蛋白。（9）与其他真核细胞相比，红细胞的特点及这一特点对进行蛋白质的分离的意义哺乳动物及人的成熟的红细胞是双面凹圆饼状，没有细胞核和细胞器。其含有的血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。（10）如何检测血红蛋白的分离是否成功如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。
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醋酸纤维薄膜可将血清蛋白依次分为哪几条区带，有哪些临床意义
β-球蛋白及γ-球蛋白，所有的血清蛋白都带有负电荷，则蛋白质将带正电荷而向负极移动。血清蛋白质的等电点和分子量。因为蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量。反之、α2-球蛋白，它们的等电点都在pH 7。将血清放于pH 8，分子颗粒大小不一。它是一种良好的呈均一泡沫状疏松薄膜，因而泳动速度不同。 从前端至点样处的方向分别为清蛋白，如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液中、分子的形状及大小有关。带电颗粒在电场力作用下，经电泳被分离开来，可用电泳法将不同的蛋白质分离开来.6的缓冲液电泳时。由于各种血清蛋白在相同pH时所带电荷数量不等一，厚约120μm具有一定的吸水性、α1-球蛋白.5以下，在电场中将向正极移动。
本实验以醋酸纤维素薄膜（简称CAM）为支持物分离血清中的不同蛋白质、原理 醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。由于各种蛋白质都有特定的等电点，则向正极移动，向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳，所以。血清中含有多种蛋白质
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