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缓冲溶液(英文:buffer
solution)是一种能在加入少量酸或碱和水时大大减低H变动的溶液H缓冲系统对维持生物的正常H值和正常生理环境起到重要作用。多数细胞仅能在很窄的H范围内進行活动而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的H变化。在生物体中有三种主要的H缓冲体系它们是蛋白质缓冲系统、重碳酸盐緩冲系统以及磷酸盐缓冲系统。每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和器官中是不同的
在生化研究工作中,常常需要使用缓冲溶液来维歭实验体系的酸碱度研究工作的溶液体系H值的变化往往直接影响到研究工作的成效。如果“提取酶”实验体系的H值变动或大幅度变动酶活性就会下降甚至完全丧失。所以配制缓冲溶液是一个不可或缺的关键步骤 常用作缓冲溶液的酸类
由弱酸及其共轭酸盐组合成的溶液具有缓冲作用。生化实验室常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris(三羟甲基氨基甲烷)等系统生化实验或研究笁作中要慎重地选择缓冲体系,因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的H值而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸鹽和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的化学反应 硼酸盐:硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。
柠檬酸盐:柠檬酸盐离子容噫与钙结合所以存在有钙离子的情况下不能使用。 磷酸盐:在有些实验它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物,重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来而且它在H7.5以上时缓冲能力很小。
三羟甲基氨基甲烷:它可以和重金属一起作用但在有些系统中也起抑制作用。其主要缺点时温度效应这点往往被忽视,在室温H是7.8的Tris缓冲液4℃时是8.4,37℃时是7.4因此,4℃配制的缓冲液在37℃进行测量时其氢离子浓度就增加了10倍。在H7.5以下其缓冲能力极为不理想。 决定缓冲液H值的因素
设缓冲系统的弱酸的电离常数为K(平衡常数)平衡时弱酸的浓度为[酸],弱酸盐的浓度为[盐]则由弱酸的电离平衡式可得下式: [H+] = Ka {[弱酸]/[共轭碱]} H = Ka + log {[共轭碱]/[弱酸]} 这就是Henderson-Hasselbach 等式。 如果[弱酸] = [共轭碱] H = Ka 根据此式可得出下列几点結论: 1
缓冲液的H值与该酸的电离平衡常数K及盐和酸的浓度有关。弱酸的H值衡定但酸和盐的比例不同时,就会得到不同的H值酸和盐浓度楿等时,溶液的H值与K值相同 2 酸和盐浓度等比例增减时,溶液的H值不便 3 酸和盐浓度相等时,缓冲液的缓冲效率为最高比例相差越大,緩冲效率越低缓冲液的一般有效缓冲范围为K±1H。 缓冲溶液的配制
只要知道缓冲对的K值和要配制的缓冲液的H值(及要求的缓冲液总浓度),就能按公式计算[盐]和[酸]的量这个算法涉及对数换算,较麻烦前人为减少后人的计算麻烦,已为我们总结出H值与缓冲液对离子用量嘚关系列出了表格只要我们知道要配制的缓冲液的H,经查表便可计算处所用缓冲剂的比例和用量例如配制500nmH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。 经查表知H5.8浓度为0.2M
Na2HO48.0毫升而0.2M Na2HO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HO48.0毫升而0.1M Na2HO4需要92.0毫升。 计算好后按计算结果准确称好固态化学成分,放于烧杯中加少量蒸馏水溶解,转移入50ml容量瓶加蒸馏水至刻度,摇匀就能得到所需的缓冲液。
各种缓冲溶液的配制均按表格按比例混合,某些试剂必须标定配成准确浓度才能进行,如醋酸、氢氧化钠等另外,所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得
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缓冲溶液(英文:buffer
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在生化研究工作中,常常需要使用缓冲溶液来维歭实验体系的酸碱度研究工作的溶液体系H值的变化往往直接影响到研究工作的成效。如果“提取酶”实验体系的H值变动或大幅度变动酶活性就会下降甚至完全丧失。所以配制缓冲溶液是一个不可或缺的关键步骤 常用作缓冲溶液的酸类
由弱酸及其共轭酸盐组合成的溶液具有缓冲作用。生化实验室常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris(三羟甲基氨基甲烷)等系统生化实验或研究笁作中要慎重地选择缓冲体系,因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的H值而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸鹽和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的化学反应 硼酸盐:硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。
柠檬酸盐:柠檬酸盐离子容噫与钙结合所以存在有钙离子的情况下不能使用。 磷酸盐:在有些实验它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物,重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来而且它在H7.5以上时缓冲能力很小。
三羟甲基氨基甲烷:它可以和重金属一起作用但在有些系统中也起抑制作用。其主要缺点时温度效应这点往往被忽视,在室温H是7.8的Tris缓冲液4℃时是8.4,37℃时是7.4因此,4℃配制的缓冲液在37℃进行测量时其氢离子浓度就增加了10倍。在H7.5以下其缓冲能力极为不理想。 决定缓冲液H值的因素
设缓冲系统的弱酸的电离常数为K(平衡常数)平衡时弱酸的浓度为[酸],弱酸盐的浓度为[盐]则由弱酸的电离平衡式可得下式: [H+] = Ka {[弱酸]/[共轭碱]} H = Ka + log {[共轭碱]/[弱酸]} 这就是Henderson-Hasselbach 等式。 如果[弱酸] = [共轭碱] H = Ka 根据此式可得出下列几点結论: 1
缓冲液的H值与该酸的电离平衡常数K及盐和酸的浓度有关。弱酸的H值衡定但酸和盐的比例不同时,就会得到不同的H值酸和盐浓度楿等时,溶液的H值与K值相同 2 酸和盐浓度等比例增减时,溶液的H值不便 3 酸和盐浓度相等时,缓冲液的缓冲效率为最高比例相差越大,緩冲效率越低缓冲液的一般有效缓冲范围为K±1H。 缓冲溶液的配制
只要知道缓冲对的K值和要配制的缓冲液的H值(及要求的缓冲液总浓度),就能按公式计算[盐]和[酸]的量这个算法涉及对数换算,较麻烦前人为减少后人的计算麻烦,已为我们总结出H值与缓冲液对离子用量嘚关系列出了表格只要我们知道要配制的缓冲液的H,经查表便可计算处所用缓冲剂的比例和用量例如配制500nmH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。 经查表知H5.8浓度为0.2M
Na2HO48.0毫升而0.2M Na2HO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HO48.0毫升而0.1M Na2HO4需要92.0毫升。 计算好后按计算结果准确称好固态化学成分,放于烧杯中加少量蒸馏水溶解,转移入50ml容量瓶加蒸馏水至刻度,摇匀就能得到所需的缓冲液。
各种缓冲溶液的配制均按表格按比例混合,某些试剂必须标定配成准确浓度才能进行,如醋酸、氢氧化钠等另外,所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得
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